植物總酚檢測(cè)試劑盒(比色法)使用說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品組成:

保質(zhì)期:12個(gè)月有效；低溫運(yùn)輸，按要求保存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

植物組織或果實(shí)中存在花青素、葉綠素、類胡蘿卜素、類黃酮、酚類等物質(zhì)，這些物質(zhì)與果實(shí)等樣品衰老過(guò)程密切相關(guān)，對(duì)其加工性能、存儲(chǔ)、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值等都有重要影響，植物酚類物質(zhì)具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健作用而廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。

植物總酚檢測(cè)試劑盒(比色法)檢測(cè)原理是總酚(Total  Phenol)溶于有機(jī)溶劑，以有機(jī)溶劑粗提總酚，根據(jù)提取液的吸收光譜特性，可利用分光光度計(jì)在特定波長(zhǎng)(280nm)處測(cè)定其吸光度，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出總酚含量，主要用于植物組織或果實(shí)中總酚的提取以及定量檢測(cè)總酚含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、實(shí)驗(yàn)材料：桃子、李子、蘋(píng)果、杏等果實(shí)或其他植物組織

2、天平、稱量紙、剪刀、研缽或勻漿器、離心管、離心機(jī)、濾紙或紗布

3、石英比色杯、紫外分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考):

1、總酚提取：

①取果實(shí)或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品0.25g，置于4℃預(yù)冷的研缽或勻漿器。

②加入4℃預(yù)冷的2~3ml  TPAssayBuffer，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入10ml離心管，用TPAssayBuffer沖洗研缽或勻漿器并轉(zhuǎn)移至離心管，補(bǔ)加TPAssayBuffer至8ml。

③4℃避光靜置20min，期間搖動(dòng)2~3次，然后過(guò)濾至離心管中，也可用離心機(jī)8000r/min離心3min，濾液(上清液)即為總酚粗提液。

2.稀釋總酚標(biāo)準(zhǔn)溶液:將總酚標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)用TP  AssayBuffer稀釋成總酚標(biāo)準(zhǔn)(50ug/ml)，取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，依次稀釋。

3、TP加樣：按照下表設(shè)置空白管、對(duì)照管、測(cè)定管；如果樣品中的總酚濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置2平行管，求平均值。

注意：如用較大的比色杯，可相應(yīng)增加試劑量，其后計(jì)算公式中V1=加樣時(shí)所用總酚粗提液的體積(ml)應(yīng)相應(yīng)發(fā)生變化。

4、TP測(cè)定：各管試劑加入光徑1cm的石英比色杯中，在5~15min內(nèi)，以空白管調(diào)零，用紫外分光光度計(jì)280nm處測(cè)定系列標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管的吸光度。

計(jì)算：

以1-6號(hào)管系列總酚標(biāo)準(zhǔn)濃度(5、10、  15、20、25、30μg/ml)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而計(jì)算出各測(cè)定孔總酚濃度(ug/ml)。

組織樣品的總酚(ug/g)=C×VT×N/W

液體樣品的總酚(ug/ml)=C×N

式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得的測(cè)定管總酚濃度(ug/ml)

VT=總酚粗提液總體積(ml)=8

W=樣品鮮重(g)

N=稀釋倍數(shù)

注意事項(xiàng)：

1、為了避免總酚見(jiàn)光分解，操作時(shí)應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿時(shí)應(yīng)盡量縮短時(shí)間。

2、取樣量、試劑用量應(yīng)根據(jù)總酚含量適當(dāng)調(diào)整。

3、TPAssayBuffer應(yīng)密閉保存，避免有效成分揮發(fā)。

4、測(cè)定時(shí)，石英比色皿上應(yīng)加蓋，防止揮發(fā)。

5、測(cè)定應(yīng)及時(shí)，時(shí)間延長(zhǎng)，總酚濃度高時(shí)，測(cè)定結(jié)果可能偏低。

6、植物總酚濃度在10~20ug/ml范圍時(shí)，OD值基本穩(wěn)定，超出范圍時(shí)結(jié)果隨時(shí)間有稍微變化。

7、如果沒(méi)有紫外分光光度計(jì)，也可以使用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)定。

8、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。