儲存事項:

1.        次使用時，將試劑盒所帶的全部RNase A加入溶液YP1（終濃度100µg/ml）置于4℃保存。如果溶液YP1中RNase A失活，提取的質粒可能會有微量RNA殘留，在溶液YP1中補加RNase A即可。

2.        環境溫度低時溶液YP2中SDS可能會析出渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。

3.     Lytic Enzyme為蝸牛酶甘油儲液，因此比較粘稠，請小心取用，－20℃保存。 蝸牛酶是從蝸牛的嗦囊和消化道中制備的混合酶，它含有纖維素酶，果膠酶，淀粉酶，蛋白酶等20多種酶。適合破碎溶解各種酵母的細胞壁。

4.          避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

v  產品介紹：

本試劑盒采用改進SDS-堿裂解法裂解細胞并結合lytic Enzyme特異消化酵母細胞壁，能在1小時內從酵母培養液中分離出高純度質粒DNA。酵母收集后，加入破壁酶去除細胞壁后，然后堿裂法裂解細胞，離心吸附柱內的硅基質膜在高鹽、低PH值狀態下選擇性地結合溶液中的質粒DNA，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質和其它細菌成分去除， 后低鹽、高PH值的洗脫緩沖液將純凈質粒DNA從硅基質膜上洗脫。

v  關于平衡液的使用

1.          介紹：核酸吸附硅膠膜柱子長期放置過程中會同空氣中的電荷/塵埃發生反應而影響其核酸的結合能力。硅膠柱經平衡液預處理后可大大減少柱子中硅膠膜的憎水基團，提高核酸的結合能力。從而提高硅膠柱子回收效率或者產量。平衡液是強堿性溶液，若不小心碰到，請用大量自來水清洗。用完后需蓋緊瓶蓋，以免接觸空氣。室溫保存。在保存過程中可能有沉淀生成，請加熱至37℃使沉淀*消失。

2.          使用方法：取一個新的硅膠膜吸附柱子裝在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液，將吸附柱子重新放回收集管。此時平衡液預處理柱子完畢。接后續的操作步驟。

v  注意事項

1.          所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2.          溶液YP3和去蛋白液PE中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

3.          通常酵母質粒拷貝數都很低，一般通過電泳或者分光光度計都很難檢測到。提取的質粒如果用于下游試驗時通常建議使用量為： 1-5μl用做PCR 模板;5-10μl 用于轉化大腸桿菌,選擇商業化的率的感受態細胞。

4.          用戶需要自備Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na₂EDTA，28 mMβ-巰基乙醇)。配制方法：在600 ml 去離子水里面溶解 182.2克山梨醇，加入200 ml 0.5 M Na₂EDTA (pH 8.0) ，不需要調節PH值，定容到1L，4℃保存。臨用前加0.2%β-巰基乙醇(商品化的β-巰基乙醇摩爾濃度一般為14M)。

5.          菌體濃度檢測一般OD₆₀₀值為1的時候,釀酒酵母細胞是1-2x10⁷ cells/ml，由于菌種和分光度計不同即使同樣細胞數量OD值變化也很大，以上僅供參考。

6.          洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫質粒應該保存在－20℃。質粒DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。

v  操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）