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常用細胞固定劑及其優缺點比較

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1、95%酒精:常用的細胞學固定液,能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,但核蛋沉淀后,能溶于水,因此,經95%酒精固定的涂片,染色前沒有必要經過水洗。此固定液適用于蘇木素-伊紅染色和巴氏染色。固定時間根據標本的不同,時間也不盡相同,一般標本固定時間為15-30分鐘,痰標本需要更長一些時間。經過95%酒精固定的標本,細胞核保存較好,結構清晰,顏色鮮艷。如果在95%酒jing液內加入聚乙二醇更佳,可以保護細胞免受空氣干燥后的人工假象。

 

2、乙mi酒jing液(1:1):其效果與95%酒精相似,但由于乙mi有很強的吸水性和*的刺激性氣味,容易揮發,長期低濃度吸入,有頭痛、頭暈、疲倦、嗜睡、蛋白尿、紅細胞增多等不良反應。長期皮膚接觸,可發生皮膚干燥、皸裂。所以現在已經逐漸被95%酒精所代替。

 

3、甲醇:固定時間快,細胞收縮小,細胞核保存較好,結構清晰,染色鮮艷。常作為穿刺細胞涂片的固定液。對抗原保存較好,可作為細胞涂片免疫組化的固定液。缺點是具有揮發性和毒性,大量接觸與吸入對中樞神經有一定的傷害。甲醇的毒性與其代謝產物甲醛和甲酸的蓄積有關。以前認為毒性作用主要為甲醛所致, 甲醛能抑制視網膜的氧化磷酸化過程, 使膜內不能合成ATP,細胞發生變性,后引起視神經wei縮。近年研究表明,甲醛很快代謝成甲酸,急性中毒引起的代謝性酸中毒和眼部損害,主要與甲酸含量相關。

 

4、冰醋酸:5%水溶液可作固定用。不能沉淀白蛋白,但能沉淀核蛋白。滲透性強,固定快,能使紅細胞膨脹而破碎,常與其它液體配合使用。

 

5、*: 對糖原保存較好,容易使細胞收縮,其性能與95%酒精相似,很少單獨使用,一般只用于糖原的固定。

 

6、丙酮:為易揮發的無色液體,有刺激性氣體。可使蛋白質沉淀,滲透性強,細胞收縮嚴重,對核的固定差。很少用于常規細胞學的固定。廣泛用于酶組織化學中的各種酶的固定,也有人用于抗原的保存,作為細胞涂片免疫組化的固定液。丙酮具有揮發性和毒性,大量接觸與吸入對肝、腎及中樞神經有一定的傷害。

 

7、Carnoy 固定液:配方:無水乙醇60ml,氯fang30ml,冰醋酸10ml

Carnoy液能固定胞漿和胞核,尤其適宜于染色體等。常用于糖原及尼氏體的固定,由于冰醋酸能溶解紅細胞并可防止細胞由酒精引起的過渡收縮,對固定有血的標本和顯示DNA、RNA效果很好。缺點是每次固定后固定液內有大量的紅細胞碎片和細胞脫落,必須及時過, 否則容易造成污染。其次,氯fang具有揮發性和毒性,大量接觸與吸入對肝、腎及中樞神經有一定的傷害。

 

8、10%中性緩沖甲醛液:

配方1:40%甲醛10ml,0.01mol/L pH7.4的PBS90ml。

配方2:40%甲醛120ml,蒸餾水880ml,磷酸二氫鈉(NaH2PO4;H2O)4g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4) 4g,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)13g。

 

10%中性緩沖甲醛液對大多數抗原保存較好,是免疫組織化學常用的固定液,組織穿透好,組織收縮較小。但此液體不適合固定濕固定的涂片,可作為干固定涂片和細胞蠟塊的定液。甲醛也具有揮發性和毒性。大量吸入會出現呼吸道的嚴重刺激和水腫、眼刺痛、頭痛,也可發生支氣管哮喘。經常吸入少量甲醛,能引起慢性中毒, 出現粘膜充血、皮膚刺激癥、過敏性皮炎、指甲角化和脆弱、甲床指端疼痛等。全身癥狀有頭痛、乏力、胃納差、心悸、失眠、體重減輕以及植物神經紊亂等。

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