在競爭法ELISA試劑盒中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強(qiáng)度取決于反應(yīng)中酶結(jié)合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調(diào)節(jié)陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應(yīng)zui為敏感。
因肉眼很難辨別弱陽性反應(yīng)與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。
a. 陽性判定值法
與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計算公式中引入陽性對照A值，現(xiàn)舉某種檢測抗HBc的ELISA試劑盒為例。ELISA試劑盒中的陰性對照為不含抗HBc的復(fù)鈣人血漿，陽性對照中抗HBc含量為125±100u/ml。每次試驗設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。測得A值后，先計算陰性對照A值的平均值（NCX. ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），ELISA試劑盒兩個平均數(shù)的差（N-P）必須大于一個特定的數(shù)值（例如0.300）,ELISA試劑盒試驗才有效。3個陰性對照A值均應(yīng)小于2.000，而且應(yīng)≥0.5×NCX. 并≤1.5×NCX. ，如其中之一超出此范圍，則棄去，而以另2個陰性對照重新計算×NCX. ；如有2個陰性對照A超出以上范圍，則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算：
陰性判定值=0.4×NCX. 0.6×PCX
標(biāo)本A值≤陽性判定值的反應(yīng)為陽性，A＞陽性判定值的反應(yīng)為陰性。
b. 抑制率法
抑制率表示標(biāo)本在競爭結(jié)合中標(biāo)本對陰性反應(yīng)顯色的抑制程度，ELISA試劑盒按下式計算：
抑制率（%）=. （陰性對照A值-標(biāo)本A值）×*/陰性對照A值
一般規(guī)定抑制率≥50%為陽性，＜50%為陰性。
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