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質粒抽提的7大竅門介紹

閱讀:284發布時間:2015-9-24

elisa試劑盒 質粒抽提方法即去除 RNA,將質粒與細菌基因組 DNA分開,去除蛋白質及其它雜質,以得到相對純凈的質粒。


質粒抽提zui常用的方法是堿裂解法,它具有得率高,適用面廣,快速,純度高等特點。關于堿裂解法的原理,復旦大學生化與分子生物學實驗室的有一篇專論,大家可以去看一下。這是一篇美文,elisa試劑盒非常有趣。文中提到了一個與幾乎所有能查到的資料不同的觀點,也是非常有啟發的。


下面介紹質粒抽提的7大竅門:

1:搖菌時間 - 過夜培養是一個普遍接受的概念,而且適合大部分情況。如果出現了問題,調整培養時間會有幫助:Nick 多,則增加培養時間;酶切出現問題,則減少培養時間。

2:起始菌體量 - 大家習慣說“從多少 ml 菌液中抽提質粒",但一定要養成每次都觀察菌體量的習慣,因為質粒畢竟是在菌體中,而且,抽提質粒所用的試劑量,都只與菌體量有關。

elisa試劑盒3:菌體的*懸浮 - 如果沒有*懸浮菌體,則殘留的菌體團塊在溶液 II 加入后,變成一個外圍幾乎*裂解,往里不*裂解,中間沒有裂解的團塊。這個團塊在溶液 III 加入后,會有一部分蛋白質繼續存在于溶液中,成為蛋白質殘留的zui大根源。

4:使用相對過量的試劑 - 這是適合所有核酸抽提的建議。試劑相對過量的好處是:穩定性好,純度高,操作更簡單。如果認為這樣不經濟,就少用一點菌體。

5:裂解時間 - 加入溶液 II 后,混勻,體系能立即變得清澈。體系如果變得清澈了,馬上加入溶液 III 中和。如果體系不馬上變清澈,下次少用一點菌液,或者多用一點溶液。如今的質粒設計得越來越復雜了,奇怪的現象也越來越多,而所有的奇怪現象,多與裂解時間有關。

6:中和的操作 - 在 1.5ml 離心管中加入溶液 III 后,先顛倒兩次,使管底朝上,用指頭彈擊管底數次,再顛倒混勻。效果非常好。

7:中和后的離心去蛋白 - 一定要將蛋白質*離心下去。如果發現離心后仍然有蛋白質漂浮在液面,繼續離心的效果并不好;而將上清倒入另外一個離心管中,再離心,效果要好許多

Phospho-HSL (Ser660) 英文名稱: 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體  0.1ml
HURP 英文名稱: 肝癌上調蛋白抗體  0.2ml
Hrasls3 英文名稱: HRAS樣抑制因子3抗體  0.2ml
CBS 英文名稱: *羧甲半*合成酶抗體  0.1ml
HEC1 英文名稱: 癌細胞高表達蛋白Hec1抗體  0.1ml
Phospho-HSL (Ser865) 英文名稱: 磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶抗體  0.1ml
HDAC1 英文名稱: 組蛋白去乙酰化酶1抗體  0.2ml
C1GALT1C1 英文名稱: 半乳糖基轉移酶2抗體  0.1ml
phospho-HP1 alpha (Tyr24) 英文名稱: 磷酸化異染色質蛋白1抗體(果蠅)  1ml
Phospho-HP1(Tyr43) 英文名稱: 異染色質蛋白1磷酸化抗體(果蠅)  1ml
HIF 2 alpha 英文名稱: 缺氧誘導因子2α /HIF-2α抗體  0.1ml
H1N1 matrix protein 2 英文名稱: 甲型流感病毒M2抗體  0.2ml


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