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大豆凝集素(SBA)elisa試劑盒使用方法

閱讀:159發布時間:2014-12-31

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檢測范圍:                                                        96T

50ng/L -850 ng/L

使用目的:

本試劑盒用于測定植物組織,細胞及其它相關樣本中大豆凝集素(SBA)含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大豆凝集素(SBA)水平。用純化的大豆凝集素(SBA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入大豆凝集(SBA),

再與HRP 標記的大豆凝集素(SBA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大豆凝集素(SBA)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大豆凝集素(SBA)濃度。

試劑盒組成

1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶7終止液6ml×1 瓶

2 酶標試劑6ml×1瓶8標準品(1600ng/L)0.5ml×1瓶

3 酶標包被板12孔×8 條 9 標準品稀釋液1.5ml×1瓶

4 樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份

5 顯色劑A 液6ml×1瓶11封板膜2張

6 顯色劑B 液6ml×1瓶12密封袋1個

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。

2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

800ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

400ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

200ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

100ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

50ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8 .洗滌:操作同5。

9 .顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.

10 .終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11 .測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。


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