檢測范圍： 96T
6μg/L -200μg/L
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中B 細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)水平。用純化的大鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入B 細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)，再與HRP 標記的B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶
2 酶標試劑6ml×1瓶8標準品（400μg/L）0.5ml×1瓶
3 酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書 1 份
5 顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張
6 顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
200μg/L5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
100μg/L4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
50μg/L3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
25μg/L2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5μg/L1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔，在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍），加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘。
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。
