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技術(shù)文章

蛋白質(zhì)的分離純化

閱讀:147發(fā)布時(shí)間:2015-6-2

(一)根據(jù)配體特異性的分離方法-親和色譜法
ELISA試劑盒親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質(zhì)/的一種極為有效的方法,它經(jīng)常只需經(jīng)過一步處理即可使某種待提純的蛋白質(zhì)從很復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據(jù)某些蛋白質(zhì)與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價(jià)地結(jié)合。其基本原理:蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中是以復(fù)雜的混合物形式存在,每種類型的細(xì)胞都含有上千種不同的蛋白質(zhì),因此蛋白質(zhì)的分離(Separation),提純(Purification)和鑒定(Characterization)是生物化學(xué)中的重要的一部分,至今還沒的單獨(dú)或一套現(xiàn)成的方法能移把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合蛋白質(zhì)中提取出來,因此往往采取幾種方法聯(lián)合使用。

(二)根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小的差別的分離方法
1、透析與超濾 
ELISA試劑盒透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開。
超濾法是利用高壓力或離心力,強(qiáng)使水和其他小的溶質(zhì)分子通過半透膜,而蛋白質(zhì)留在膜上,可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質(zhì)。
2、凝膠過濾法 
也稱分子排阻層析或分子篩層析,ELISA試劑盒這是根據(jù)分子大小分離蛋白質(zhì)混合物zui有效的方法之一。柱中zui常用的填充材料是葡萄糖凝膠(Sephadex ged)和瓊脂糖凝膠(agarose gel)。亞利桑那菌瓊脂(SA)      Salmonella Arizona Agar    100    用于亞利桑那沙門氏菌的選擇性分離(SN標(biāo)準(zhǔn))
亞碲酸鹽卵黃增菌液     Egg-Yolk lurite Emulsion    5ml*10    加入Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ)中
亞碲酸鈉肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)       Sodium lurite Broth Base    250    用于*的增菌培養(yǎng)。每100ml培養(yǎng)基需另加入1%亞碲酸鈉1ml
新生霉素A    Novobiocin    2mg/支*5    添加于100ml mEC肉湯和mTSB肉湯中用于0157選擇性增菌
新生霉素    Novobiocin Sodium Salt    1.5mg/支*5    使用前,每支加入100mlHB4153中
心浸液瓊脂    Heart Infusion Agar    250    用于培養(yǎng)營養(yǎng)要求高的微生物 (ACUMEDIA方法)
現(xiàn)隱肉湯    Presence Absence Broth    250    用于水中大腸菌群計(jì)數(shù)(US-EPA方法)
細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基    Total Genes Chromogenic Medium     250g    用于快速、準(zhǔn)確檢測細(xì)菌總數(shù),培養(yǎng)24小時(shí),細(xì)菌顯紅色
西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂         Simmons Citrate Agar    250    用于腸道菌的檸檬酸鹽利用試驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)         Wagstsuma Agar Base    250    用于神奈川現(xiàn)象試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
衛(wèi)矛醇半固體瓊脂        Dulcitol Semisolid Agar    10    生化培養(yǎng)基,用于細(xì)菌衛(wèi)予醇發(fā)酵試驗(yàn)(SN標(biāo)準(zhǔn))
兔血漿      Rabbit  Plasma    0.5ml*20    用于*凝固酶試驗(yàn)
四環(huán)素檢定瓊脂        Tetracyline Examination Agar    250    用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))
四號(hào)瓊脂基礎(chǔ)          No.4 Agar Base    250    用于霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng),滅菌冷至50℃加入亞碲酸鉀,倒平板
水平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基    Water Plate Count Agar    250    用于飼料中細(xì)菌總數(shù)測定
嗜鹽菌選擇性瓊脂      Halophilic Bacteria Selective Agar    250    用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
*麥康凱瓊脂基礎(chǔ)(SMAC)       Sorbitol Maconkey Agar Base    250    用于大腸桿菌0157的分離培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))


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