原代細胞操作方法
雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過一夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。
間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過一夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；
4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.’zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。
發(fā)展前景
臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學的發(fā)展，而方法學的發(fā)展依托于試劑技術(shù)不斷進步更新和型標記物的應用。分子生物學正在并zui終肯定會讓對整個生命科學有一個全面而*的認識，其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對以前一些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定，并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性
原代細胞10 µg 人小腦顆粒細胞總RNA HCGC tRNA
10 µg 人海馬趾神經(jīng)細胞總RNA HN-h tRNA
10 µg 人少突膠質(zhì)前體細胞總RNA HOPC tRNA
10 µg 人少突膠質(zhì)前體細胞(懸浮生長)總RNA HOPC-os tRNA
10 µg 人雪旺細胞總RNA HSC tRNA
10 µg 人神經(jīng)束膜細胞總RNA HPC tRNA
10 µg 人星形膠質(zhì)細胞總RNA HA tRNA
10 µg 人小腦星形膠質(zhì)細胞總RNA HA-c tRNA
10 µg 人脊髓星形膠質(zhì)細胞總RNA HA-sp tRNA
10 µg 人海馬趾星形膠質(zhì)細胞總RNA HA-h tRNA
10 µg 人小膠質(zhì)細胞總RNA HM tRNA
10 µg 人微血管內(nèi)皮細胞總RNA HDMEC tRNA
10 µg 人淋巴內(nèi)皮細胞總RNA HDLEC tRNA
10 µg 人表皮角質(zhì)細胞總RNA HEK tRNA
10 µg 人表皮角質(zhì)細胞-成人總RNA HEK-a tRNA
10 µg 人表皮黑色素細胞-淺色素總RNA HEM-l tRNA
10 µg 人表皮黑色素細胞-中色素總RNA HEM-m tRNA
10 µg 人表皮黑色素細胞-深色素總RNA HEM-d tRNA
10 µg 人成纖維細胞-胎兒總RNA HDF-f tRNA
10 µg 人成纖維細胞-新生兒總RNA HDF-n tRNA
10 µg 人成纖維細胞-成人總RNA HDF-a tRNA
10 µg 人生發(fā)基質(zhì)細胞總RNA HHGMC tRNA
10 µg 人淋巴內(nèi)皮細胞總RNA HLEC tRNA
10 µg 人淋巴成纖維細胞總RNA HLF tRNA
10 µg 人口腔角質(zhì)細胞總RNA HOK tRNA
10 µg 人牙齦成纖維細胞總RNA HGF tRNA
10 µg 人牙周膜成纖維細胞總RNA HPLF tRNA
10 µg 人食道上皮細胞總RNA HEEpiC tRNA
10 µg 人食道平滑肌細胞總RNA HESMC tRNA
10 µg 人腸微血管內(nèi)皮細胞總RNA HIMEC tRNA
10 µg 人腸平滑肌細胞總RNA HISMC tRNA
10 µg 人結(jié)腸平滑肌細胞總RNA HCSMC tRNA原代細胞
