當前位置：上海紀寧實業有限公司>>技術文章>>雙抗體夾心法的檢測操作步驟
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物".類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落.鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果.因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg,AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的值.用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應.
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物.但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr,adw,ayr,ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題.
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾.RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合.用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應.采用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由于去除了Fc段,從而消除RF的干擾.雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標(參見6.2).
雙抗體夾心法適用于測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心.
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