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連接酶鏈反應(ligase chain reaction,LCR)是繼PCR后,新出現的一種更加完善的DNA體外擴增和檢測技術。在檢測點突變等方面具有*的優點。
(一) LCR的原理
該技術是利用DNA連接酶構建共價磷酸鍵,特異地連接雙鏈DNA,經加熱變性、退火和連接等步驟后,再多次反復循環,從而使目的DNA得以大量擴增。
(二) LCR的主要用途
主要用途有以下三個方面。
1. 單堿基突變遺傳病的檢測
該技術在識別點突變方面優于PCR,該技術首先用于單堿基突變遺傳病的診斷;據報道已用LCR識別了鐮狀細胞貧血患者珠蛋白基因發生的A→T替換。
2.
病原微生物的檢測可用于李氏桿菌、結核桿菌、淋球菌及沙眼衣原體等病原微生物種及亞種的鑒別。
3.
定向誘變LCR法能連接PCR擴增片段,進行多位點同時定向誘變,或隨機設計,因而是一種有效的基因改建和構造方法。
總之,LCR設計*,在某些方面特別是檢測點突變方面是有優勢的,目前尚不能為其他手段取代,它作為一種DNA擴增和檢測技術,具有很大的發展前景
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