2016年02月17日 13:32研生elisa 銷售網點（上海研生實業有限公司）點擊量：740
熒光素標記試劑與酶標試劑
(1)酶標試劑：酶標抗體僅需適當底物和普通光學顯微鏡即可高度敏感地檢出抗原。由于信號是通過吸收光的差異，而非發射光來檢測，底物的不溶性顯色產物分布在酶所在位置的周圍區域，因此這種檢測方法尚不能達到熒光技術的分辨率。
酶反應后出現沉淀，在酶所處位置周圍產生不溶性顯色產物，通過底物的顯色來檢出酶標試劑所處位置。多種酶及底物可供選擇，但近年來多選用辣根過氧化物酶(HRP)及底物二氨基聯苯胺(DAB)來進行培養細胞的染色。
多種試劑已經商品化，其價格便宜，且具有較好的質量。HRP可與抗Ig抗體、蛋白A、蛋白G、親和素或鏈霉親和素等共價偶聯，其中任何一種二級試劑均可用于檢測與目標抗原結合的一抗的位置。
(2)熒光素標記試劑：這種檢測方法中，樣品置于特定波長的光波下進行檢測。熒光染料的電子吸收合適波長的光波后達到較高能量狀態，當其再回到基礎狀態時，即發射出特定波長的光波。這種發射光形成了在顯微鏡下所看到的熒光。
由于樣品中熒光染料被激發后發出的熒光集中于一點，因此運用熒光標記所獲亞細胞結構的分辨率較透射顯微鏡更高。例如，應用此法在熒光顯微鏡下可觀察到直徑為5nm的細胞中纖絲結構。這就超過了的光學顯微鏡的分辨率。這種方法在敏感性方面的主要缺陷由于熒光染料在暴露于激發光后短時間猝滅所造成的相對弱的發射光，因此，此法傳統上用于濃度較高抗原的檢測。然而， 由于熒光染料及共聚焦掃描顯微鏡、高靈敏度照相機等圖像分析系統的出現，這個領域的發展極為迅速。
各種熒光染料具有不同的激發及發射光譜。安置濾光鏡能夠確保只有正確波長的激發光通過以便激發樣品產生熒光。在觀察光路上安置第二套濾光鏡使得僅由熒光染料激發產生的發射光才能通過，這樣，觀察到的是一個僅由發射光形成的圖像，而背景是黑色的，這種圖像的分辨率很高。
由于某些熒光染料的發射光譜并不重疊，同一樣品可同時采用2種熒光染料進行觀察。這樣能夠同時檢測同一樣品的2種不同的抗原，甚至能夠研究其在亞細胞結構上的分布不相同。常用的熒光染料有異硫氰酸熒光素(FITC)、羅達明和得克薩斯(Texas)紅等。
細胞染色常用染料的特性
檢測熒光標記的試劑需要一個特殊的顯微鏡，有兩種顯微鏡可供選擇：熒光顯微鏡較為便宜，約2萬～5萬美元。若細胞染色中產生的熒光強度較弱，則須配置epifluore—science裝置，以使激發光通過物鏡照射在樣品上。用于免疫熒光檢測的第二種顯微鏡是共聚焦顯微鏡， 目前市面上有幾種共聚焦顯微鏡，價格在10萬～40萬美元之間。其原理是用高度聚焦的光線在不同的焦平面上照射樣品，從而激發樣品產生熒光，再從各個焦平面來觀察樣品，經數字化處理后形成圖像，這樣能夠得到細胞的各個子面圖像，并且通過合成得到整個細胞的圖像。這兩種顯微鏡均能夠良好地應用于細胞染色。
(3)熒光素與酶：兩種細胞染色法均實用。如果實驗要求操作簡單，用同一條件觀察大量樣品，用酶聯檢測法較好；如實驗要求高分辨率，則應用熒光素標記檢測法；共聚焦顯微鏡比相差顯微鏡具有更高的分辨率。如考慮敏感性，選用共聚焦顯微鏡法，再依次為酶聯法及熒光顯微鏡法。如考慮到價格因素，則酶聯法為。抗體
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