細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備F-12K培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
中文名稱:RARα激動劑(AM580)
英文名稱:AM580
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
產品貨號:BJ-01X7393
AM580是一種穩定的retinobenzoic衍生物,是RARα的激動劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! :102121-60-8 別名:CD336;NSC608001;Ro 40-6055 純度:99.41% 分子量:351.44 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Erwinia pyrifoliae亞洲梨火疫病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FAM84B/BCMP101 膜相關蛋白101抗體 規格: 0.2ml
Herba polygoni avicularis萹蓄PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周PCANAP2/Prostein 前列相關蛋白2抗體 規格: 0.2ml
Epizootic Hemorrhagic Disease Virus(EHDV)流行性出血熱病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TRAF6 瘤壞死因子受體相關因子6抗體 規格: 0.1mlphospho-Androgen Receptor (Ser212) 磷酸化雄激素受體抗體 規格: 0.1ml
Vibrio tapetis蛤弧探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ANKRD26 錨蛋白重復結構域蛋白26抗體 規格: 0.2mlphospho-PKA beta(Ser338) 磷酸化蛋白激Aβ抗體 規格: 0.1ml
Radix ophiopogonis麥冬染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周RNF160/ZNF294 環指蛋白160抗體 規格: 0.2mlCCDC134 卷曲螺旋結構域蛋白134抗體 規格: 0.2ml
Enteropathogenic E.coli(EPEC)腸致病性大腸桿(大腸埃希氏)LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SEK1/MKK4 絲裂原活化蛋白激激4抗體 規格: 0.2mlWnt1 信號通路Wnt1抗體 規格: 0.1ml
Babesia perroncitoi柏氏巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Aspartate Aminotransferase 谷草轉氨抗體 規格: 0.2mlGoat Anti-human IgG/HRP 辣根過氧化物標記的羊抗人IgG 規格: 0.1ml
Radix asteris紫菀探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周TGF beta R2/TGFBR2 轉移生因子β受體2抗體(TGF-βRⅡ) 規格: 0.2mlCCNDBP1/GCIP 周期素D結合蛋白1抗體 規格: 0.2ml
Mycoplasma haemofelis貓血支原體LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的羊抗大鼠IgG 規格: 0.1mlNecdin 生抑制蛋白NDN抗體 規格: 0.2ml
Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)腸出血性大腸桿O157:H7血清型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周PCDHGA2 原鈣粘蛋白γA2抗體 規格: 0.2mlNAIP 神經細胞凋亡抑制蛋白抗體 規格: 0.2ml
RARα激動劑(AM580)IMPDH抑制劑(AVN-944)
MET抑制劑(LY2801653 dihydrochloride)
JAK2抑制劑(NVP-BSK805 dihydrochloride)
ATR抑制劑(AZ20)
ALK/IGF1R抑制劑(AZD-3463)
JNK抑制劑(AS601245)
人17,20-裂解酶(17,20-lyase)抑制劑(Orteronel)
VEGFR2抑制劑(ZM323881 hydrochloride)
PI3K同工酶抑制劑(IC-87114)
Mps1抑制劑(AZ3146)
溴結構域蛋白TRIM24和BRPF1抑制劑(IACS-9571 Hydrochloride)