1、將已經(jīng)電泳確定的可回收的酶切產(chǎn)物在合適濃度的回收用瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。換用新的電泳緩沖液10×TAE(10×Tris-乙酸)。
　　
　　2、當(dāng)溴酚藍(lán)遷移至足夠距離時(shí)(至少2cm以上)，在長(zhǎng)波紫外燈下觀察，用清洗過(guò)的刀片在目的片段前切下與目的片段同長(zhǎng)，寬度適當(dāng)(一般2cm左右)的膠塊。
　　
　　注意：
　　
　　①不要忘記在膠下墊一個(gè)新的塑料手套防止污染。
　　
　　②小心不要將回收膠切裂，同時(shí)注意與目的帶相鄰的切面要盡量平整。
　　
　　3、將切好的回收膠塊放在回收膠槽內(nèi)，在切去膠塊處加入低熔點(diǎn)瓊脂糖膠，待其凝固后將其小心放回電泳槽繼續(xù)進(jìn)行電泳。小心低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠塊與原回收膠塊的交界面易斷裂。
　　
　　4、待目的帶*進(jìn)入低熔點(diǎn)瓊脂糖膠后，在長(zhǎng)波紫外燈下用清洗過(guò)的刀片切下含有所需DNA帶的凝膠條，置于新的滅菌的1.5mLeppendorf管中，加300µLTE。
　　
　　5、65℃水浴10min或更長(zhǎng)使膠塊*融化。
　　
　　6、立即加入等體積(300~350µL)Tris-Cl飽和酚(pH8.0)，搖晃混勻。
　　
　　7、12000rpm離心5min。
　　
　　8、小心將水相移到另一1.5mLEppendorf管中，加入2.5~3倍體積(780µL即可)預(yù)冷無(wú)水乙醇。注意不要吸入下層雜質(zhì)及酚相，沒(méi)把握時(shí)寧可放棄一些上層水相。
　　
　　9、12000rpm離心5min。
　　
　　10、小心將水相移到另一1.5mLEppendorf管中，加入2.5~3倍體積(780µL即可)預(yù)冷無(wú)水乙醇。注意不要吸入下層雜質(zhì)及酚相，沒(méi)把握時(shí)寧可放棄一些上層水相
　　
　　11、置液氮3min，取出后可置于-20℃放幾min。小心防止管子爆裂。
　　
　　12、12000rpm離心10min。
　　
　　13、迅速棄上清，一般在管底會(huì)有針尖大小的沉淀物，小心用無(wú)水乙醇清洗后置于恒溫器上干燥(55℃)5~10min至無(wú)乙醇?xì)馕叮偌尤?0µLddH2O溶解。
　　
　　14、取20µL電泳定量后-20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?