方法一
A液：1M，MnCl2：
B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用無(wú)菌水配，配后不需滅菌；
C液 稱取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部轉(zhuǎn)入細(xì)口試劑瓶，然后加入46ml三蒸水，輕輕振蕩使所有組分充分溶解。將瓶塞蓋上并用牛皮紙、棉線包扎，然后放入滅菌鍋121℃高壓滅菌備用。
取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混勻后，再用1ml移液器加入3.3ml A液，混勻冰浴即可使用。
劃線得到單菌落,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)約17小時(shí)， 挑取2-4個(gè)形態(tài)飽滿的單菌落接種于裝有100ml SOB 培養(yǎng)基的三角瓶,37℃劇烈振蕩（300 rpms）培養(yǎng)3-4小時(shí), 將培養(yǎng)溫度調(diào)至18℃劇烈振蕩（3280 rpms）培養(yǎng)，其余與普通感受態(tài)差不多，每管加入4ml TB緩沖液，輕輕振蕩，使菌體重新懸浮，加入280ml DMSO（可用國(guó)產(chǎn)分析純），混勻后分裝入1.5ml EP管，冰上靜置15分鐘。用紗布將所有裝有感受態(tài)的EP管包好，用棉線系好后放入液氮中速凍，在液氮中靜置12小時(shí)以上。取出感受態(tài)放入-70℃超低溫冰箱備用。
效率非常高，一般可到10*8，好時(shí)可到10*9，特別適宜于大片段與文庫(kù)構(gòu)建及珍貴材料的連接轉(zhuǎn)化。

潔凈是zui重要的。無(wú)菌都無(wú)所謂，在操作臺(tái)上可正常操作。離心力要注意不要超過(guò)2500g,建議1500-2000g 5min。涂板要注意，不要覺(jué)得不勻而多次反復(fù)，輕輕在平板上帶一下感覺(jué)板上大部分地方走過(guò)即可，特別在冰箱中保存過(guò)或在溫箱中溫浴2小時(shí)以上的板。涂完后建議空氣晾干（20-30分鐘）這樣會(huì)減少衛(wèi)星菌落出現(xiàn)。

預(yù)冷是必要的。整個(gè)過(guò)程的低溫也并非特別重要，只要注意就行了，我在去殘液時(shí)經(jīng)常在室溫倒置1min，對(duì)感受態(tài)效率提高有幫助，*次多加一點(diǎn)緩沖液，我經(jīng)常加至20ml，效果不錯(cuò)。

關(guān)于大腸桿菌的感受態(tài)制備及轉(zhuǎn)化的方法很多，zui復(fù)雜的莫過(guò)于電轉(zhuǎn)化，而zui簡(jiǎn)單的則是將LB平板上的菌落直接挑入裝有緩沖液的EP管冰箱即開(kāi)始轉(zhuǎn)化。對(duì)于做克隆工作的人而言，高而穩(wěn)定的感受態(tài)可減輕不少麻煩。
現(xiàn)在大腸桿菌轉(zhuǎn)化效率zui高的要數(shù)電轉(zhuǎn)化，可達(dá)到1010，但是操作起來(lái)比較麻煩。要想又簡(jiǎn)單，又能有較高的轉(zhuǎn)化效率，的莫過(guò)于1990年《GENE》上刊登的由Inoue H.等提出的感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化方法。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況，我們將其稍作修改，做成了GLP文件，但其中仍有許多可改進(jìn)或需要注意的地方，其中有一些對(duì)普通感受態(tài)效率的提高也有一定的幫助。