一、定義； 免疫PCR是利用抗原抗體反應的特異性和pcr擴增反應的*靈敏性而建立的一種微量抗原檢測技術。 用抗體檢測抗原是免疫學的zui基本方法，用酶或同位素標記抗體可使檢測的敏感性提高，常用的定量檢測方法ELISA和RIA均基于標記分子可以使檢測的信號增強。免疫PCR是在ELISA的基礎上建立起來的新方法，用PCR擴增代替ELISA的酶催化底物顯色。PCR具有很強的放大能力，其可以定量地檢測DNA和RNA，具有非常高的敏感性和特異性，因此，將與抗原結合的特異抗體通過連接分子與DNA結合，再經PCR擴增，由此定量檢測抗原使敏感性高于ELISA和RIA。
二、基本原理： 免疫PCR主要由兩個部分組成，*部分的免疫反應類似于普通的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)的測定過程;第二部分即通常的PCR檢測，抗原分子的量zui終由PCR產物的多少來反映。*步中，首先用待測抗原(如牛血清白蛋白(ESA))包被微滴板孔，再加入相應的特異抗體，于是抗體就與固相上的抗原結合形成抗原抗體復合物，蛋白A-鏈親合素(Protein A-Streptavidin)嵌合體(重組融合蛋白)中的蛋白A部分可與固相上抗原抗體復合物中的抗體IgG結合，而鏈親合素部分可與生物素化的pUC19(質粒DNA) (Biotin-pUC19)中的生物素反應，從而將特定的DNA間接吸附于固相。接下來，就是第二步中的PCR過程，*步中吸附于固相的pUC19質粒DNA在相應的引物存在下，可經PCR在幾小時內而放大數百萬倍，PCR產物的多少與固相上抗原的量成正比。PCR由 ①待測抗原；②生物素化抗體；③親和素（連接分子）；④生物素化DNA；⑤PCR擴增五部分構成。
1 待檢抗原被檢測的樣品可以是抗原，或者是作為抗原的某種抗體。待檢的抗原可以直接吸附于固相，這一過程與elisa試驗是相同的，因此有些吸附性差的抗原不能應用目前介紹的免疫PCR方法進行檢測，需要對免疫PCR進行改進，以便能夠檢測吸附性差的抗原。免疫PCR的后續過程需PCR擴增，目前有些方法應用的固相板或管是特殊用于免疫PCR，并且有些PCR僅可以直接用微量板進行擴增，這樣可以簡化實驗過程和提高檢測的性。免疫PCR具有非常高的敏感性，特別適用于檢測微量抗原。
2 特異抗體 免疫PCR中的特異抗體是對應于待檢抗原，與ELISA一樣，抗體的特異性和親合力將影響免疫PCR的特異性和敏感性。一般均選用單克隆抗體，這個抗體常采用生物素標記，通過親和素再結合DNA。
3 連接分子 連接分子是連接特異抗體與DNA之間的分子。目前介紹的方法中均是通過生物素與親和素系統使特異抗體與DNA連接，生物素和親和素作為免疫PCR的連接分子在連接方式上有許多差異。Sano報道PCR時用的是重組葡萄球菌A蛋白-親和素嵌合蛋白(SPA-親和素)。其具有結合IgG和生物素的兩個位點，因此可以將IgG與生物素化的DNA連接成復合物。由于重組的SPA-親和素沒有商品試劑，且SPA不但可以結合特異抗體的IgG，而且還可以與樣品中吸附于固相的無關IgG結合，特別是檢測的抗原就是某種IgG，因此，Ruzicke認為Sano的免疫PCR本底高和特異性差。Ruzicke用商品化的親和素系統試劑建立了一種免疫PCR，這種方法是先將親和素與生物素化的DNA預結合成復合物，然后再與結合固相的特異性抗體結合，這種方法存在的問題是親和素與生物素化的DNA分子預結合時二者的分子比例并不是等同的，一個親和素分子可以結合4個分子生物素，因此在預結合時生物素化的DNA分子不能過多，否則DNA分子上的生物素將親和素*飽和，親和素再無結合生物素化抗體的能力;但在低飽和生物素化DNA時，親和素結合的生物素化DNA存在許多種類的復合物，甚至還有游離的親和素，只有部分結合生物素化DNA的親和素才能起到連接分子的作用，因此，這樣預結合的親和素和生物素化DNA是一均質性很差的混合物。雖然預結合的復合物可以減少測試過程中的1次孵育和沖洗，但是這樣的復合物作為連接分子必然導致敏感性低和誤差大，并且每次制備的連接分子均有差異，從而導致重復性差。Hong zhou等建立了一種免疫PCR方法，連接分子是鏈親和素，在連接抗體和DNA時是以游離的方式加入，這樣鏈親和素先與生物素化抗體結合，沖洗后，再加入生物素化的DNA。這個方法雖然多了1次孵育和沖洗過程，但具有較好的敏感性和重復性。