當前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術文章>>小籃子法(廣口瓶法)測定植物的呼吸速率
一、原理
植物進行呼吸時放出CO2,計算一定的植物樣品在單位時間內放出CO2的數量,即為該樣品的呼吸速率。呼吸放出的CO2可用氫氧化鋇溶液吸收,實驗結束后用已知濃度的草酸溶液滴定剩余的堿液,從空白和樣品二者消耗草酸溶液之差即可計算出呼吸過程中釋放的CO2的量。
二、材料、設備儀器及試劑
(一)材料:發芽的小麥種子或其它萌發的種子。
(二)儀器設備:1.呼吸測定裝置;2.天平;3.鐘表;4.酸式及堿式滴定管;5.溫度計
(三)試劑:1. 0.05mol/L 左右的Ba(OH)2:稱取Ba(OH)2 8.6g溶于1000ml蒸餾水中;2. 1/44mol/L 草酸溶液:準確稱取重結晶的H2C2O4.2H2O 2.8651g溶于蒸餾水中定容至1000ml,每ml相當于1mgCO2;3. 酚酞指示劑:1g酚酞溶于100ml 95%乙醇中,貯于滴瓶中。
三、實驗步驟
1. 取500ml廣口瓶一個,瓶口瓶用打有三孔的橡皮塞塞緊,一孔插一盛堿石灰的干燥管,使呼吸過程中能進入無CO2的空氣,一孔插溫度計,另一孔直徑約1cm,供滴定用,平時用一小橡皮塞塞緊,瓶塞下面掛一鐵絲紗小籃,以便裝植物樣品,整個裝置即謂“廣口瓶呼吸測定裝置”。
2. 在瓶口準確加入約0.05mol/L 的Ba(OH)2溶液20ml,立即塞緊橡皮塞(不帶小籃),充分搖動廣口瓶2min,待瓶內CO2全部被吸收后,拔出小橡皮管塞,加入酚酞指示劑2滴,把滴定管插入孔中,用標準草酸溶液進行空白滴定,直到紅色剛剛消失為止。
3. 倒出廢液,用無CO2的蒸餾水(煮沸過的)洗凈后,重加上述Ba(OH)2溶液20ml,同時稱取植物樣品5~10g,裝入小籃子中,掛于橡皮塞下,塞緊瓶塞,開始記錄時間,經過20~30min,其間輕輕搖動數次,使溶液表面的BaCO3薄膜破壞,有利于充分吸收CO2。然后用草酸滴定,方法如前。(注意:防止口中呼出的氣體浸入瓶內?。?/p>
四、結果計算
呼吸速率(mgCO2/g(FW)/h)=(A-B)×1/(W×t)
上式中,A:空白滴定用去的草酸量(ml);B:樣品滴定用去的草酸量(ml);W:樣品鮮重(g);t:測定時間(h)。每毫升1/44mol/L 的草酸相當于1mgCO2。
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