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當(dāng)前位置:上海士鋒生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>士鋒生物植物組織培養(yǎng)材料與方法
由于植物在自然條件下,表面常被霉菌和細(xì)菌污染,故材料必須進(jìn)行滅菌處理。一般用漂白粉溶液(1~10%)、次氯酸鈉溶液(0.5~10%)、升汞溶液(0.01%)、乙醇(70%)或過(guò)氧化氫(3~10%)等處理后,再用無(wú)菌水反復(fù)沖洗至凈,然后在無(wú)菌室內(nèi),將所取的組織迅速培養(yǎng)在固體培養(yǎng)基上。在適宜的條件下,受傷組織切口表面不久即能長(zhǎng)出一種脫分化的組織堆塊,稱為愈傷組織(Callus),此種愈傷組織在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上經(jīng)一定時(shí)間即能誘導(dǎo)生長(zhǎng)成整株植物,因此愈傷組織既可是某種植物代謝產(chǎn)物的來(lái)源,又是誘導(dǎo)成株的主要途徑之一。
在適宜的培養(yǎng)條件下,還可使愈傷組織長(zhǎng)期傳代生存下去,這種培養(yǎng)稱為繼代培養(yǎng)。但在繼代培養(yǎng)中,不少植物培養(yǎng)的組織或細(xì)胞隨著再培養(yǎng)代數(shù)的增加,分化能力就逐漸降低甚至喪失,其原因可能是由于在培養(yǎng)過(guò)程中原有母體中存在的、與器官形成有關(guān)的特殊物質(zhì)被逐漸消耗所致,因此可以用激素或改善營(yíng)養(yǎng)條件使之恢復(fù),也有認(rèn)為是組織和細(xì)胞在長(zhǎng)期培養(yǎng)中遺傳往的改變,主要是染色體的變化,出現(xiàn)大量多倍性或非整倍性細(xì)胞,這種改變恢復(fù)的可能住較小。不同的培養(yǎng)基可以使愈傷組織具有不同的生長(zhǎng)速度,結(jié)構(gòu)也可松可緊,利用這些特性可使之分散成為單細(xì)胞或很小的細(xì)胞團(tuán)。要形成單細(xì)胞培養(yǎng)宜在較高鹽分、高生長(zhǎng)素及高水解酪蛋白的培養(yǎng)基中進(jìn)行,然后移入液體并經(jīng)攪拌而分散成單細(xì)胞。也有用加入一些果膠酶的辦法,但一般來(lái)說(shuō)要得到純一的單細(xì)胞是很少的。
在培養(yǎng)藥用植物選材時(shí),還應(yīng)考慮到所需要的次生物質(zhì)在植物體中的合成部位,如果選材和培養(yǎng)方法適當(dāng),可使原植物內(nèi)所產(chǎn)主的代謝物通過(guò)細(xì)胞或組織培養(yǎng)發(fā)生生化轉(zhuǎn)變而獲得。
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