1）用淋巴細胞分離液分離PBMC 
1．抽取正常人靜脈血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸鹽（PBS）懸浮細胞。將此懸液小心加在淋巴細胞分離液上，400×g離心30分鐘。 
2．離心后紅細胞在管底，PBMC在血漿和淋巴細胞分離液的交界面。收集PBMC，用PBS洗滌細胞兩次，每次離心150×g 10分鐘。低速離心可以減少血小板沉淀，但細胞沉淀物較松散，去上清液時注意丟棄細胞。 
3．將細胞懸浮于含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，計數(shù)細胞，用1％臺盼藍染色檢測細胞活力（應(yīng)>90%），再用同樣培養(yǎng)液將細胞配成1×106～2×106/ml。 

2）分離大顆粒淋巴細胞 
1．配制不連續(xù)Percoll梯度：取Percoll原液與10倍濃縮的PBS以9：1的比例混合，此時溶液為100％ Percoll，比重是1.127，毫克分子滲透壓濃度為290mOsmol/kg。將100％ Percoll與含0.75％牛血清蛋白的RPMI-1640培養(yǎng)液混合配成41.1％、45.8％、50.0％和66.6％的Percoll溶液。在41.4％和50.0％ Percoll溶液中加一滴0.1％臺盼藍，以便區(qū)分個梯度溶液的交界面。 
2．在50ml離心管中從下向上依次小心加入66.6％、50.0％、45.8％和41.1％的Percoll溶液各10ml，使分別形成明顯的交界面。再小心加水10ml約含5×108PBMC的細胞懸液。水平離心500×g 30分鐘。 
3．分別收集各交界面的細胞，用RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細胞3次，每次離心500×g 10分鐘。用含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細胞配成適當濃度。LGL的密度較低，主要在41.4％和45.8％的交界面。50％和66.6％交界面細胞主要是T細胞，45.8％和50％交界面細胞是T細胞和LGL的混合物。三個交界面中的細胞都有LAK活性。 

3）其它來源的效應(yīng)細胞 
1．無菌摘取胎兒胸腺、胎肝、胎脾或腫瘤的引流淋巴結(jié)，置含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培養(yǎng)液的平皿中。 
2．在無菌操作下，用注射器芯將上述器官擠壓通過200目的鋼絲網(wǎng)，得到單個細胞。用上述培養(yǎng)液洗滌細胞一次。 
3．將細胞懸浮于上述培養(yǎng)液中，計數(shù)細胞，用臺盼藍染色檢測細胞活力（應(yīng)>80％），再用同樣培養(yǎng)液將細胞配成1×106～2×106/ml。 

4）LAK細胞的誘生和擴增 
1．向上述各種來源的淋巴細胞懸液中加重組IL-2到1000U/ml。以2×106/ml的細胞濃度，在37℃ 5％ CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天，細胞即具有LAK活性。 
2．培養(yǎng)3～5天的LAK細胞數(shù)量基本沒有變化。如需較多的LAK細胞，可以繼續(xù)培養(yǎng)至2～3周：每當細胞生長到5×106～10×106/ml時分瓶，用同樣培養(yǎng)液將細胞配成1×106～2×106/ml，再加IL-2繼續(xù)培養(yǎng)。