一. 實驗目的：
通過實驗掌握原生質體的獲得與培養技術
二. 實驗原理：
植物原生質體就是除去了細胞壁的一個為質膜所包圍的的裸露細胞，用酶降解法脫去細胞壁的具有活力的原生質體，其在合適的離體培養條件下具有繁殖，分化，再生成為完整植株的能力。利用原生質體便于開展那些因細胞壁存在而難以進行研究的問題，如質膜的表面特性，細胞壁的形成，細胞器的攝取，體細胞的雜交及作為基因式程研究的良好受體系統，通過導入特定基因，獲得轉基因植株等等。植物原生質體作為一種研究系統，如同在細胞水平上研究某些問題，比在組織、器官或個體水平上有方便之處。
三、實驗材料，試劑和儀器
1．材料
無菌煙草葉片
目前已經從高等植物的根、莖、葉、果實、種子等各種組織和器官分離得到原生質體，葉片、愈傷組織和懸浮細胞是容易取材的常用材料，若利用無菌苗可免去表面滅菌的操作步驟避免因條件不適而產生的材料生長的不良影響。
2．試劑
1）酶混合液
按1g材料加入10ml，酶混合液的比例配制。
配制分兩步進行：

用重蒸餾水溶解，調pH5.6，定容至10mL，為酶儲備液，滅菌備用。
（2）使用時，再加入纖維素酶 R—10 1%
果膠酶 R—10 0.8%
因酶制劑經過高壓滅菌處理后會失活，故先將酶儲備液滅菌，待用時再將酶制劑按比例加入到*步已滅菌的溶液內。
（3）一般酶制劑都不太純，配好后要經3500rpm離心5min，棄去其中雜質，吸取上清液備用。（所用離心管、滴管等均應經過高壓滅菌）
2）洗液
CaCl2·2H2O 8mmol/L
NaH2PO4·2H2O 2mmol/L
甘露醇 0.5mol/L
3）Kg培養基
大量無素： 微量元素：
KNO3 2500 MnSO4·4H2O 10
NH4NO3 250 ZnSO4·7H2O 2 
(NH4)2SO4 134 H3BO4 3
MgSO4·7H2O 250 KI 0.75
CaCl2·2H2O 900 Na2MoO4·5H2O 0.025
CaHPO4·H2O 50 CoCl2·6H2O 0.025
鐵液： Na——EDTA 37.2
FeSO4·7H2O 27.8