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外源基因進入細胞主要有三種方法:電擊法、磷酸鈣法和脂質(zhì)體介導法,實際上其基本原理都是利用不同的方法在細胞上短時間暫時性的穿孔讓外源質(zhì)粒進入,但是由于前兩者的效率低且傷害較大,所以現(xiàn)在除了對于一些特殊細胞系,一般的轉(zhuǎn)染方法都利用脂質(zhì)體。
利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和其他方法一樣,zui重要的就是防治其毒性,因此脂質(zhì)體與治理的比例,細胞密度以及轉(zhuǎn)染的時間長短和培養(yǎng)基中血清的含量都是影響轉(zhuǎn)染效率的重要問題,通過實驗摸索的合適轉(zhuǎn)染條件對于效率的提高有巨大的作用。
本實驗學習和掌握外源基因?qū)胝婧思毎闹饕椒?— 脂質(zhì)體介導的轉(zhuǎn)染。了解外源基因進入的一般性方法,觀測外源蛋白的表達(綠色熒光蛋白)。
【試劑與儀器】
1 、胎牛血清。
2 、雙抗溶液(鏈霉素 100μg+ 青霉素 100 單位)。
3 、DMEM 培養(yǎng)基。
4 、轉(zhuǎn)染試劑( LIPOFECTAMINE 2000 )。
5 、細胞培養(yǎng)基( DMEM+10%NCS )。
6 、PBS 。
7、無血清培養(yǎng)基。
8 .胰酶( Trypsin )。
9 .培養(yǎng)皿,移液管,量筒,恒溫水浴箱,離心機, 15ml 離心管,微量移液器,熒光顯微鏡和 CCD 。
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