原理：這一方法基于考馬斯亮藍G-250 有紅藍兩種不同的形式。在一定濃度的乙醇及酸性條件下，可配成淡紅色的溶液，當與蛋白質結合后，產生藍色化合物，反應迅速而穩定。反應化合物在465-595nm處有zui大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關系，因此可檢測595nm的光吸收值的大小計算蛋白的含量。

溶液：

1）Bradford儲存液

100ml95%乙醇

200ml88%磷酸

350mgServaG藍

室溫下長期保持穩定。

2）Bradford工作液

425ml雙蒸水

15ml95%乙醇

30ml88%磷酸

30ml Bradford儲存液

用濾紙過濾，保存于室溫棕色瓶中，可保存數周，但在使用前需要過濾。

3）配制1mg/ml牛血清蛋白（BSA）

做標準曲線：

取樣品即可測量。

注意事項：

1、樣品制備，樣品制備是做好2-d 的關鍵，樣品中離子濃度不能過大，用新鮮的樣品提取蛋白質，如果不確定蛋白提取情況，建議先跑sds-page檢驗。

2、上樣量的問題， ipg 膠條是13 厘米的上樣量在50ng-80ng之間，上樣量不合適，豐度低的將會被豐度高的所遮蓋。

3、ipg 膠條ph 的選擇，根據不同樣品選擇不同pH值。

4、針對不同的蛋白質，分離膠的濃度需調整。