1 轉(zhuǎn)染前一天將293T細(xì)胞鋪于10cm板，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80％左右即可進(jìn)行PEI轉(zhuǎn)染。
2將下列DNA加入一個(gè)已裝有480ul 1* HBS( PH 7.4)滅菌管混勻
三質(zhì)粒系統(tǒng)：
12ug vector
6ug VSVG
9ug PHR
四質(zhì)粒系統(tǒng)：
12ug vector
6ug VSVG
6ug RSV-REV
6ug pMDL
3. 將10* PEI 劇烈振蕩后加入到360ul 1* HBS( PH 7.4)滅菌管混勻
4. 將混勻的PEI加入到裝有DNA的滅菌管中，用槍頭吹吸15次混勻，室溫30分鐘
5．吸去待轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)液換成5ml無血清DMEM培養(yǎng)，待DNA靜置時(shí)間到達(dá)，將DNA混合液逐滴均勻加入到細(xì)胞培養(yǎng)皿中，用手輕搖混勻平皿
6．6-8小時(shí)后，將無血清DMEM移去，換成13ml 10％血清的正常DMEM于37培養(yǎng)包裝病毒
7．在隨后的三天，每天收集細(xì)胞上清于一個(gè)滅菌的50ml管中保存于4℃，隨后更換新鮮培養(yǎng)液
注：對(duì)于pBoBi和pll3.7來說，決定其滴度的關(guān)鍵因素就是包裝質(zhì)粒時(shí)的轉(zhuǎn)染效率

8. 收集的細(xì)胞上清液經(jīng)過0.45um一次性濾器過濾，除去細(xì)胞碎片
9．將35ml過濾的上清加入到一個(gè)高速離心管中，離心管用培養(yǎng)液平衡并用封口膜封口
10. 4℃，70000g離心2小時(shí)后，用移液管小心移去上清，加入1ml培養(yǎng)液并用移液管小心吹吸大概20下至沉淀溶解
11. 收集到的病毒根據(jù)所需量，在終濃度6-10ng/ul polybrene 存在下加入到70％左右目的細(xì)胞的6孔板中
注：收集的病毒也可液氮速凍后至于-80℃保存，凍存的濃縮病毒應(yīng)該沒有滴度降低，
12. 6孔板于37℃2500rpm離心30分鐘后，置于37℃培養(yǎng)
13. 24小時(shí)后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞狀態(tài)并換液
注：如果此時(shí)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞大量死亡，可以考慮減少感染時(shí)間，或是降低polybrene濃度