芳香物質(zhì)是具揮發(fā)性的、能夠產(chǎn)生一定氣味的含香物質(zhì)的總稱(chēng)，它是構(gòu)成和影響果品鮮食、加工質(zhì)量的主要因素。到目前為止，已從杏果實(shí)中鑒定出100多種芳香物質(zhì)。芳香物質(zhì)分析一般要經(jīng)過(guò)芳香物質(zhì)的提取、純化、濃縮、氣相色譜分離并配合質(zhì)譜定性定量。為了得到較全面的分析，往往需要同時(shí)使用幾種提取方法。
加熱果汁，使之在100℃以下沸騰，產(chǎn)生二次蒸汽，夾帶芳香物質(zhì)從果汁中分離出來(lái)，然后用有機(jī)溶劑從中回收揮發(fā)性物質(zhì)，揮發(fā)性物質(zhì)在溶劑相和蒸餾液之間的分配系數(shù)不同，通過(guò)溶劑的選擇，排除那些不重要或干擾分析的化合物，有選擇性的提取芳香物質(zhì)。同時(shí)蒸餾萃取法是蒸餾提取和溶劑提取的合并，同時(shí)加熱果汁和溶劑，兩種蒸汽混在一起后完成萃取工作。它吸收了二者的優(yōu)點(diǎn)，并且只需少量的溶劑就可有效地提取大量樣品中的揮發(fā)性成分。經(jīng)提取、純化、濃縮的精油，采用氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分離鑒定。通過(guò)檢索譜圖庫(kù)，并結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖，確認(rèn)化學(xué)成分；運(yùn)用峰面積歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，求得了各化學(xué)成分的含量。
本實(shí)驗(yàn)以杏果實(shí)為試材，學(xué)習(xí)芳香物質(zhì)的提取分離及測(cè)定方法。
一、試材及用具
1．試材 杏果實(shí)
2．儀器 氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀（agilent 6890N-5973N型）、KD濃縮器、同時(shí)蒸餾萃取裝置（SDE）、電熱恒溫水浴鍋、套式恒溫加熱裝置等。
3．試劑 二氯甲烷、無(wú)水硫酸鈉（AR）、3-壬酮等。
二、方法步驟
1．果實(shí)芳香物質(zhì)的提取
采用同時(shí)蒸餾萃取法，裝置見(jiàn)下圖。A瓶中裝有樣品和蒸餾水，B瓶中裝有二氯甲烷或其他有機(jī)溶劑，兩部分加熱后，各自的蒸汽在裝置的頂部混合，并通過(guò)冷凝管冷卻，在EF段分層，有機(jī)層從D端返回B瓶，水層從C端返回A瓶，這樣便完成了整個(gè)萃取過(guò)程。如此連續(xù)進(jìn)行，使樣品中的揮發(fā)性有機(jī)物萃取濃縮。
稱(chēng)取杏果肉500g，打漿后置于3L圓底燒瓶中，加入內(nèi)標(biāo)物3-壬酮（zui終濃度為0.7ppm），加入1L蒸餾水；于250mL圓底燒瓶中加二氯甲烷60mL。將SDE裝置安裝好，樣品液用套式恒溫器加熱，保持微沸狀態(tài)，二氯甲烷于55℃水浴中加熱，連續(xù)蒸餾萃取3h。二氯甲烷萃取液中加無(wú)水硫酸鈉5g，脫水干燥一晝夜，過(guò)濾。濾液于50℃濃縮，回收二氯甲烷，濃縮至0.2～0.4mL，得到芳香物質(zhì)濃縮液。待氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定。
2．氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定
（1）氣相色譜條件 色譜柱：HP-5彈性石英毛細(xì)管柱25m×0.25mm×0.1μm; 柱溫40℃（2℃/min）-250℃保持40 min；汽化室溫度270℃；進(jìn)樣量0.2μL；載氣He流量1mL/min;分流比100:1。
（2）質(zhì)譜條件 gc-ms接口溫度280℃，EI離子源；離子源溫度230℃；電子能量70ev；質(zhì)量范圍29～600amu。

3．芳香物質(zhì)的定性與定量
（1）定性分析
芳香物質(zhì)組分分離大多數(shù)采用氣相色譜法，不同組分形成其各自的色譜峰，按照色譜峰的保留值來(lái)定性。芳香物質(zhì)成分的鑒定可用紅外光譜、紫外光譜、毛細(xì)管色-質(zhì)譜聯(lián)用、核磁共振等方法。目前zui廣泛的采用色-質(zhì)譜聯(lián)用法。
取芳香物質(zhì)提取物0.2μL，用氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定。通過(guò)G1701CA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，檢索Nist98/Wiley圖譜，再結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行人工譜圖解析，確認(rèn)芳香物質(zhì)的各個(gè)化學(xué)成分。
（2）定量分析
a．歸一化法 歸一化法應(yīng)用時(shí)，必須將樣品的全部組分餾出，并都能產(chǎn)生相應(yīng)信號(hào)。
計(jì)算公式為：
Pi % = mi /(m)×100% = Aif ′i / (A1f 1′1+A2f 2′2+…+Anf n′)×100%
式中：Pi—i組分的百分含量
mi—被測(cè)組分i的量；
m—被測(cè)物試樣的總重量；
Ai—i組分峰面積；
f ′i—相對(duì)校正因子
相對(duì)校正因子f ′i，即為物質(zhì)i和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)S的校正因子（fi /fs）之比，其定義：是被測(cè)物質(zhì)單位峰面積所相當(dāng)物質(zhì)的量是標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)單位峰面積相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)量的幾倍。f′i可由文獻(xiàn)中查得，也可以測(cè)得，測(cè)定方法：先準(zhǔn)確稱(chēng)量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和被測(cè)物，然后混合均勻進(jìn)樣，測(cè)出它們的峰面積，按下式計(jì)算。
f ′i = fi / fs = (mi / Ai) / (MS / As)
通過(guò)G1701CA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，按面積歸一化法進(jìn)行定量分析，求得各化學(xué)成分在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量。
b．內(nèi)標(biāo)法 將各標(biāo)準(zhǔn)純品配制成系列濃度梯度，加3-壬酮1.0μL做內(nèi)標(biāo)，用二氯甲烷定容至10mL，然后以各標(biāo)準(zhǔn)純品與內(nèi)標(biāo)的峰面積之比值對(duì)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的含量作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)各標(biāo)準(zhǔn)純品各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，按以下公式計(jì)算實(shí)際試樣中芳香物質(zhì)含量（ppb）
芳香物質(zhì)含量（ppb）=C×V / (M×L)×100
式中：C—從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的含量（μg）
V—芳香物質(zhì)量(mL)
M—試樣量（g）
L—進(jìn)樣量（μL）