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上海士鋒生物科技有限公司
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士鋒生物細菌的生化反應

時間:2014-3-28閱讀:937
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細菌的新陳代謝都是在各種不同酶的催化下進行的,由于不同細菌的酶系統不同,其對營養物質的分解能力亦有差異,代謝產物亦不相同。故可利用生化反應的方法,測定細菌的各種代謝產物,借以區別和鑒定細菌。 
一、單糖發酵試驗 
不同細菌具有發酵不同糖類的酶,因而分解糖類的能力各不相同。有的能分解某些糖產酸,有的則既能產酸又能產氣,有的則不能分解,據此可以鑒別細菌。常用的糖(醇)有葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖等。 
【材料】 
1、菌種:大腸桿菌、傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物。 
2、培養基:乳糖、葡萄糖液體發酵管。 
【方法】 
1、將大腸桿菌、傷寒桿菌分別以穿刺法接種于乳糖及葡萄糖發酵管中,經37℃孵育18-24小時后觀察結果。 2、如細菌生長,則培養基變混濁;糖是否被分解,根據以下現象判定: 
(1)指示劑仍為紫色不變,表示細菌不分解該糖,用“-”表示; 
(2)指示劑由紫變黃,無氣體產生,表示細菌分解該糖,產酸不產氣,用“+”表示; 
(3)指示劑由紫變黃,并有氣體產生,表示細菌分解該糖,產酸又產氣,用“⊕”表示。 
注:液體單糖發酵管是在無糖肉湯或蛋白胨水中加入1%糖類,指示劑常用溴甲酚紫,pH感應界為5.6-6.6,色調由黃→紫。 
【結果】 葡萄糖 乳糖 
大腸桿菌 ⊕ ⊕ 
傷寒桿菌 + -
二、吲哚(靛基質)試驗 
某些細菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨中的色氨酸而生成吲哚(靛基質)。吲哚本身無色,不能直接觀察,如與吲哚試劑中的對二甲基氨基苯甲醛作用,形成紅色的玫瑰吲哚,即為吲哚試驗陽性。本試驗常用于鑒別某些腸道桿菌。 
【材料】 
1、菌種:大腸桿菌、產氣桿菌瓊脂斜面18-24小時培養物。 
2、培養基:蛋白胨水培養基。 
3、吲哚試劑。 
【方法】 
1、分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支蛋白胨水培養基中。 
2、37℃孵育24-48小時后取出,沿管壁加入2-3滴吲哚試劑于液面上,振搖試管使試劑與培養液混合,然后靜置數分種,觀看是否變色。陽性者可見上層試劑呈玫瑰紅色,仍呈黃色者為陰性。 
【結果】 大腸桿菌 +, 產生桿菌 - 
三、硫化氫試驗: 
某些細菌能分解培養基中的含硫氨基酸(如胱氨酸、半胱氨酸)生成H2So 產生的H2S遇培養基中的鉛或鐵離子,則形成黑褐色的硫化鉛或硫化鐵沉淀,黑褐色沉淀物越多,表示生成的H2S量越多,因此可間接地檢測細菌是否產生H2S。 
【材料】 
1、菌種:大腸桿菌、變形桿菌18-24小時斜面培養物。 
2、培養基:醋酸鉛培養基。 
【方法】 
1、分別穿刺接種大腸桿菌、變形桿菌于2支醋酸鉛培養基內。 
2、37℃孵育24小時后觀察,穿刺部位呈黑褐色者為陽性,不變顏色者為陰性。 
【結果】大腸桿菌 -,變形桿菌 + 
四、尿素酶試驗 
某些細菌如變形桿菌具有尿素酶,因此,在含有尿素的培養基中,能分解尿素產生氨,使培養基變堿,此時培養基中的酚紅指示劑顯紅色,借此可鑒別細菌。

【材料】 
1、菌種:大腸桿菌、變形桿菌的18~24小時斜面培養物。 
2、培養基:尿素培養基。 
【方法】 
1、分別將大腸桿菌、變形桿菌接種于兩支尿素培養基上。 
2、37℃孵育24小時觀察結果,尿素培養基變紅色者為陽性,顏色不變為陰性。 
【結果】大腸桿菌 -,變形桿菌 + 
五、細菌色素的產生: 
【材料】普通瓊脂平板,綠膿桿菌,金黃色葡萄球菌 
【方法】將綠膿桿菌,金黃色葡萄球菌分別接種于普通瓊脂平板上,經37℃24小時孵育后,觀察結果。 
注意菌落顏色及周圍培養基的顏色。

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