掌握人體微量血液體外培養(yǎng)制備染色體標本的方法。

二、實驗原理

人外周血液中的小淋巴細胞，幾乎都處在G1期（G0期），一般情況下是不再分裂的，在培養(yǎng)液中加入植物凝血素（PAH）時，這種小淋巴細胞受刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，隨后進入有絲分裂。這樣經(jīng)過短期培養(yǎng)，秋水仙素的處理，低滲和固定，就可獲得大量的有絲分裂細胞。本方法已為臨床醫(yī)學(xué)、病毒學(xué)、藥理學(xué)、遺傳毒理學(xué)等方面的廣泛應(yīng)用。

三、實驗材料

儀器設(shè)備

5毫升滅菌注射器，離心管，吸管，試管架，量桶，培養(yǎng)瓶，試劑瓶，酒精燈，燒杯，天平，離心機，恒溫培養(yǎng)箱。

材料和試劑

1．人的外周血淋巴細胞。

2．Giemsa染色液原液：配方是0.5g Giemsa＋33ml甘油＋33ml甲醇。配制方法是：在研缽內(nèi)先用少量甘油與Giemsa粉混合，研磨至無顆粒為止，再將其余甘油倒入，攪拌后56oC水浴保溫2小時，再加入甲醇，攪勻后保存于棕色瓶中。

3．Giemsa染色液應(yīng)用液：用0.1M pH7.4磷酸緩沖液稀釋Giemsa染色液原液10倍。

四、實驗步驟

1. 培養(yǎng)液的分裝：在無菌室內(nèi)或接種罩內(nèi)，用移液管將培養(yǎng)液和其他各試劑分裝入10毫升培養(yǎng)瓶中，每班8~10瓶，每瓶量為：

1640培養(yǎng)液4毫升

小牛血清1毫升

PHA0.2毫升

肝素0.05毫升

雙抗（青霉素和鏈霉素）：終濃度為：100單位/毫升

pH：7.2~7.4用3.5%碳酸氫鈉調(diào)節(jié)