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上海士鋒生物科技有限公司
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人復合培養法

時間:2014-12-29閱讀:883
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  實驗材料:
      1.  早產兒或死亡胎兒的皮膚,也可用手術取下的成體皮膚
      2.  1000000U/L中性蛋白酶,0.25%胰蛋白酶
      3.  MEM和HBSS混合液,添加20mmol/L HEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L鏈霉素和1.59g/L慶大霉素,HBSS
      4.  手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷
      5.  不銹鋼網
      6.  離心管(15ml、50ml)

      實驗方法:

      1.  的制備
      (1)  取厚1.5mm的皮片,放入4℃用MEM和HBSS混合液浸洗,切成6cm×2cm的皮條。
      (2)  在培養皿中加入HBSS,然后放皮條,使面朝下,皮片漂浮其中。在37℃條件下,孵育8-10d,每3d換液1次。
      (3)  用眼科鑷將與表皮分離,將切成0.5cm2 小片。將植塊表皮面朝上放入培養皿中。
      (4)  在-80℃和37℃下反復凍融植塊10次,以去除存活的細胞成分,從而形成以膠原纖維網架為主的組織,作為以后角質形成細胞生長的支持物,然后將植塊在-80℃下冷凍保存。

      2.  復合培養
      (1)  在37℃水浴中融化凍存的植塊,放入培養皿內,使乳頭面朝上。加入5ml培養液,在37℃條件下孵育過夜。
      (2)  將角質形成細胞種植到植塊上,培養12h。
      (3)  角質形成細胞貼附于植塊后,將復合培養的植塊轉移到無菌的不銹鋼網上,移至新的培養皿內。
      (4)  加入培養液,培養液的量不能超過不銹鋼網高度,讓表面的角質形成細胞暴露于空氣當中,促進細胞分化。在加液過程中要防止氣泡形成,以免破壞液氣界面。

      3.  結果分析
      在上復合培養的角質形成細胞分化能力良好,可分化形成明顯的棘細胞層、顆粒細胞層和角質細胞層等表皮結構。

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