新穎的去污劑混合物

即時可用的ZOOM? 2D Protein Solubilizers是1.1X溶液,由溶解在去離子、0.2微米過濾的7.7M尿素(urea)和2.2M硫脲(thiourea)中的*的去污劑混合物組成。

通過這些混合物你將:

節省時間以及消除制備錯誤--無需稱量混合固體試劑和離液劑去離子。

獲得可重復結果-ZOOM? 2D Protein Solubilizers經過優化,提供一致的質量,zui小化人為影響。

保持蛋白的溶解性--提取蛋白能夠直接應用到IPG strips,并且在飽和離液劑濃度和整個*向蛋白分離過程中保持溶解。

比傳統的UTC更好地提取蛋白

正如通過2DE和SimplyBlue? SafeStain 染色的評估,ZOOM? 2D Protein Solubilizers比目前廣泛使用的7M尿素、2M硫尿以及4%CHAPS(UTC)溶液從組織中溶解更多的蛋白(圖1 )。來自通過使用兩種ZOOM? 2D Solubilizer 提取樣品的數據揭示新的和更加密集的斑點,而且溶解良好,線條更少。事實上,只有ZOOM? 2D Solubilizer提取物能夠鑒定膜離子通道蛋白、ompF(黑箭頭)、proin和ompA(紅箭頭)。

圖1 比傳統的UTC更好地提取蛋白

使用下列混合物之一制備5%(v/v)大腸桿菌溶解物:A:ZOOM? 2D Solubilizer 1 B:ZOOM? 2D Solubilizer2℃ 尿素-硫脲- CHAPS.提取物通過ZOOM? IPGRunner? System在pH 4-7 ZOOM? strip上進行IEF。第二向分析在NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels上進行,使用SimplyBlue? Safestain 染色。

增加溶解性,提高分辨率

溶解、提取、還原和烷基化應用的方法學,對于在組分分離和等電聚焦后2D膠上蛋白的分辨率非常關鍵。ZOOM? 2D Solubilizers通過去除干擾物質和增加從大腸桿菌溶解物中蛋白的提取而改進這些制備步驟(圖2)。注意與UTG(57 斑點)比較,使用ZOOM? 2D Solubilizers1(94 斑點)和2(83 斑點)可以形成更多數量的斑點。更高的分辨率增強了分析和鑒定更多蛋白的能力。

圖2 在組分分離大腸桿菌溶解物后,接著溶解在ZOOM? 2D 增溶緩沖液,增加了蛋白的數目

使用SDS提取大腸桿菌溶解物,還原和烷基化,丙酮沉淀,再次懸浮在A:UTG;B: ZOOM? 2D Solubilizer 1;或者ZOOM? 2D Solubilizer 2使用ZOOM? IPGRunner? System和ZOOM? Strip pH 9-12進行分離,接著在NuPAGE? Novex 4-12% Bis-Tris ZOOM? Gels進行第二向分離,zui后使用SimplyBlue? Safestain 染色。