森林腦炎IgG抗體檢測試劑（酶聯(lián)法）說明書

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【預(yù)期用途】

本試劑盒可用于定量檢測人血清血漿和腦脊髓液中的抗腦炎病毒（TEBV）的IgG抗體，從而控制體液免疫狀態(tài)和確定疫苗接種后的血清轉(zhuǎn)化。鑒別明顯的和潛在的腦炎病毒的感染，通常附帶著抗腦炎病毒的IgM的檢測。

【臨床背景】

在歐洲，森林腦炎和萊姆病是zui為常見的蜱媒傳染病。萊姆病分布非常廣泛，但森林腦炎只存在于一些特殊的地方（德國南部、圖林根州、奧地利、瑞士、匈牙利、瑞典、捷克、斯洛伐克共和國、克羅地亞、斯洛文尼亞以及一些前蘇聯(lián)地區(qū)等。）。

這兩種病的感染都跟它們的發(fā)育類似，包含兩個或兩個以上的階段。森林腦炎的病毒血癥階段含有3~14天的孵育階段，在此階段的初期（1-8天） 會出現(xiàn)類似流行性感冒的癥狀。在大概一周沒發(fā)熱的間隔后，感染進(jìn)入第二階段，以神經(jīng)系統(tǒng)方面的癥狀強(qiáng)度的改變?yōu)樘卣?，這種階段可能持續(xù)幾周時間。

在疾病第二階段的初期，通?？梢詸z測到抗森林腦炎的IgM抗體?？贵w水平在2~6周后達(dá)到峰值。抗體水平要降低到可檢測以下可能需要10個月時 間?？股帜X炎的IgG抗體在IgM抗體出現(xiàn)的同時或者之后幾天內(nèi)即可檢測到。感染意味著出現(xiàn)通常能維持一生的免疫力。接種疫苗也能預(yù)防疾病。

腦脊髓液中的森林腦炎特異性抗體可能是在對森林腦炎抗原進(jìn)行免疫應(yīng)答時或者之前由血腦屏障的功能紊亂引起的，又或者是局部的免疫應(yīng)答引起的。所以，腦脊髓液中抗體水平的波動可能跟這些一般在血清或血漿中的抗體水平不一樣。

由于添加了RF/IgG吸附劑所以RF因子和特異性IgG不會干涉IgM的檢測。這兩種檢測系統(tǒng)的結(jié)合可以用于森林腦炎疫苗接種后的體液免疫隨訪或者感染，早期的森林腦炎感染和監(jiān)測人血清、血漿和腦脊髓液中的抗體水平。

【檢測原理】

本試劑盒使用的是兩步法ELISA。微孔中包被了失活的森林腦炎病毒。稀釋后的血清、血漿或者腦脊髓液樣本在微孔中孵育。孵育期間，森林腦炎特 異性抗體會跟森林腦炎病毒相集合，未結(jié)合的部分通過洗板洗去。加入酶聯(lián)物進(jìn)行孵育，HRP標(biāo)記的抗人IgG抗體會跟人IgG抗體特異性結(jié)合。加入底物液后 顏色轉(zhuǎn)變成藍(lán)色，孵育一段時間后加入終止液終止反應(yīng)，顏色從藍(lán)色轉(zhuǎn)換成黃色，zui后在酶標(biāo)儀上讀數(shù)。

【儲存和穩(wěn)定性】

此試劑盒在室溫發(fā)貨，儲存在2 – 8℃。避免高溫或太陽光直射。樣本和準(zhǔn)備好的試劑的儲存和穩(wěn)定性在相應(yīng)的章節(jié)都有闡明。包被板條在有效期內(nèi)都能保持穩(wěn)定，儲存在2 – 8℃下時應(yīng)和干燥劑一起密封在小袋中。

【樣本采集和儲存】

血清、血漿或者腦脊髓液

【試劑組成】

【試驗(yàn)需要但試劑盒不提供的設(shè)備】

1.一次性使用的5;25;50;100;500μl加樣槍頭

2.漩渦混勻器

3.樣品稀釋管

4.軌道振蕩器（200-900rpm）

5.8道微量移液器和加樣槽。

6.洗瓶，自動化或半自動化的洗板機(jī)

7.450nm的酶標(biāo)儀

8.雙蒸水或去離子水

9.紙巾，移液管，計時器

【實(shí)驗(yàn)步驟】

1.將200μL已稀釋的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣本加到相應(yīng)的微孔中。

2.用封板片封板，室溫下（18-25℃）孵育1小時

3.揭去封板片，棄去反應(yīng)液，用稀釋后的洗滌液洗板3次（250μL/孔/次），zui后通過拍板拍去殘留的液體

4.將200μL已稀釋的酶聯(lián)物加到每個孔中

5.用封板片封板，在室溫下（18-25℃）孵育1小時

6.重復(fù)步驟3

7.將200μL  TMB底物液加到每個孔中

8.室溫（18-25℃）孵育30分鐘

9.按加TMB底物液的順序，將50μL的終止液加到每個孔中，輕輕混勻

10.在加入終止液后10分鐘內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450nm±10nm處讀數(shù)。

【結(jié)果的判定】

血清/血漿

＜63VIEU/mL         陰性

63-126VIEU/mL       灰區(qū)

＞126VIEU/mL        陽性

腦脊髓液

OD＜臨界1理論OD                      陰性

臨界1理論OD＜OD＜臨界2理論OD       灰區(qū)

OD＞臨界2理論OD                      陽性

本譯文由廣州健侖生物科技有限公司技術(shù)人員編譯，僅供參考，詳情請與我們。

廣州健侖生物科技有限公司推出多種蜱蟲傳染病檢測試劑盒，萊姆病檢測試劑盒主要用于科研或輔助診斷萊姆病，可檢測萊姆病螺旋體感染，適用于血清、血漿、腦脊液、組織勻漿、細(xì)胞上清等多種樣本，同時還有森林腦炎抗體檢測試劑、流行性出血熱抗體檢測試劑、腎綜合征出血熱抗體檢測試劑、流行性乙腦病毒抗體檢測試劑、Q熱病抗體檢測試劑、立克次體（斑疹傷寒）檢測試劑盒、無形體IgG檢測試劑盒（IFA熒光玻片）、新布尼亞病毒抗體檢測試劑、恙蟲病東方體抗體(OT-Ab)檢測試劑（膠體金法）等等……

森林腦炎IgG抗體檢測試劑（酶聯(lián)法）說明書

----------------------健侖知識------------------------
森林腦炎（forest encephalitis）又名蜱傳腦炎（tickborne encephalitis）是由病毒所致的一種急性傳染病。1934年5～8月間在蘇聯(lián)東部的一些森林地帶首先發(fā)現(xiàn)本病，故又稱蘇聯(lián)春夏腦炎。野生動物，尤其是野鼠是本病的傳染源，蜱為其傳播媒介。臨床上以突發(fā)高熱、腦膜刺激癥、意識障礙和癱瘓為其特征。腦脊液有異常變化，常有后遺癥。