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單層貼壁細胞總蛋白的提取過程

閱讀:2122發布時間:2017-1-11

細胞株單層貼壁細胞總蛋白的提取:

1.倒掉培養液,并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液(或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸走)。

2.每瓶細胞加3ml 4℃預冷的PBS(0.01M pH7.2~7.3)。平放輕輕搖動1min洗滌細胞,然后棄去洗液。重復以上操作兩次,共洗細胞三次以洗去培養液。將PBS棄凈后把培養瓶置于冰上。

3.按1ml裂解液加10μl PMSF(100mM),搖勻置于冰上。(PMSF要搖勻至無結晶時才可與裂解液混合。)

4.每瓶細胞加400μl含PMSF的裂解液,冰上裂解30min,為使細胞充分裂解培養瓶要經常來回搖動。

5.裂解完后,用干凈的刮棒將細胞刮于培養瓶的一側(動作要快),然后用槍將細胞碎片和裂解液移至1.5ml離心管中。(整個操作盡量在冰上進行。)

6.于4℃下12000rpm離心5min。(提前開離心機預冷)

7.細胞株將離心后的上清分裝轉移到0.5ml的離心管中放于-20℃保存。
L- *    25g    3,5 二硝基水楊酸
L- * ( 還原型 )    5g    3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽結構類似物
L- * ( 還原型 )    5g    3'-RACE 試劑盒
L- * ( 氧化型 )    1g    4- 氨基 -N,N- 
L- *    25g    4- 甲基傘形酮
L- *    25g    4- 甲基傘形酮 -β-D- 葡糖苷酸
L- *    25g    4- 氯 -1- 萘酚
L- *鹽酸鹽    25g    4% 多聚甲醛
L- 賴氨酸    25g    4% 多聚甲醛 (RNA )
L- 賴氨酸鹽酸鹽    25g    4’,6- 二脒基 -2- 苯基吲哚
L- *    25g    4× 核酸液相雜交液
L- *    25g    4mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)
L- *    5g    4mL DNA 離心超濾管 (300-500 KD)
L- *鹽酸鹽    10g    4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)
L- 蘋果酸    25g    4mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)

細胞株

 


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