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原代細胞檢測方法雙抗體夾心法

閱讀:202發布時間:2017-7-26

原代細胞檢測方法雙抗體夾心法
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下: 雙抗體夾心法
一、將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本:使之與固相抗體接觸反應一段時間,讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合,形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體:使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物:夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物,即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步法檢測。
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現象,此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
HBVCL    人腦血管周細胞裂解物    200 µg
HCPECL    人脈絡叢內皮細胞裂解物    200 µg
HCPEpiCL    人脈絡叢上皮細胞裂解物    200 µg
HCPFL    人脈絡叢成纖維細胞裂解物    200 µg
HMCL    人腦膜細胞裂解物    200 µg
HNL    人神經細胞裂解物    200 µg
HCGCL    人小腦顆粒細胞裂解物    200 µg
HN-h L    人海馬趾神經細胞裂解物    200 µg
HOPCL    人少突膠質前體細胞裂解物    200 µg
HOPC-os L    人少突膠質前體細胞-懸浮生長裂解物    200 µg
HSCL    人雪旺細胞裂解物    200 µg
HPCL    人神經束膜細胞裂解物    200 µg
HAL    人星形膠質細胞裂解物    200 µg
HA-c L    人小腦星形膠質細胞裂解物    200 µg
HA-sp L    人脊髓星形膠質細胞裂解物    200 µg
HA-h L    人海馬趾星形膠質細胞裂解物    200 µg
HML    人小膠質細胞裂解物    200 µg
HDMECL    人微血管內皮細胞裂解物    200 µg
HDLECL    人淋巴內皮細胞裂解物    200 µg
HEKL    人表皮角質細胞裂解物    200 µg
HEK-a L    人表皮角質細胞-成人裂解物    200 µg
HELM-l L    人表皮黑色素細胞-淺色素裂解物    200 µg
HELM-m L    人表皮黑色素細胞-中色素裂解物    200 µg
HELM-d L    人表皮黑色素細胞-深色素裂解物    200 µg
HDF-f L    人成纖維細胞-胎兒裂解物    200 µg
HDF-n L    人成纖維細胞-新生兒裂解物    200 µg
HDF-a L    人成纖維細胞-成人裂解物    200 µg
HHGMCL    人生發基質細胞裂解物    200 µg
HLECL    人淋巴內皮細胞裂解物    200 µg
HLFL    人淋巴成纖維細胞裂解物    200 µg
HOKL    人口腔角質細胞裂解物    200 µg
HGFL    人牙齦成纖維細胞裂解物    200 µg
HPLFL    人牙周膜成纖維細胞裂解物    200 µg
HEEpiCL    人食道上皮細胞裂解物    200 µg
HESMCL    人食道平滑肌細胞裂解物    200 µg
HIMECL    人腸微血管內皮細胞裂解物    200 µg
HISMCL    人腸平滑肌細胞裂解物    200 µg
HCSMCL    人結腸平滑肌細胞裂解物    200 µg
HPMECL    人肺微血管內皮細胞裂解物    200 µg
HPAECL    人肺動脈內皮細胞裂解物    200 µg
HPASMCL    人肺動脈平滑肌細胞裂解物    200 µg
HPAFL    人肺動脈成纖維細胞裂解物    200 µg
HPAEpiCL    人肺泡上皮細胞裂解物    200 µg
HBEpiCL    人支氣管上皮細胞裂解物    200 µg
HTEpiCL    人氣管上皮細胞裂解物    200 µg
HSAEpiCL    人小氣道上皮細胞裂解物    200 µg
HPFL    人肺成纖維細胞裂解物    200 µg
HBSMCL    人支氣管平滑肌細胞裂解物    200 µg
HTSMCL    人氣管平滑肌細胞裂解物    200 µg

 


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