原代細(xì)胞原理與含義
ELISA試劑盒和抗體在體外特異后呈現(xiàn)的各種景象,對樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性和定量檢查。本試驗(yàn)選用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標(biāo)板上,規(guī)范品和樣品中的TNF-a與單抗,參加*化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶符號的鏈霉親和素(Streptavidin)與*,參加酶底物鄰苯二胺(OPD),呈現(xiàn)黃色,加停止液濃硫酸,色彩變深,在492nm處測OD值,TNF-a濃度與OD值成正比,可通過制作規(guī)范曲線求出標(biāo)本中TNF-a濃度。它是樣品中蛋白質(zhì)含量檢查的定性和定量方法。
操作程序?yàn)椋?br />(1)載體膜的預(yù)處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加單調(diào)進(jìn)行壓圈。將陰性、陽性抗原及被查看抗原適度稀釋后參與圈中，置37℃使硝酸纖維素膜*單調(diào)。每張7cm×2.3cm的膜一般可點(diǎn)加40－53個(gè)樣品，每個(gè)壓圈可加抗原液1－20μl。
(2) 加酶標(biāo)抗體，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，用洗刷液洗三次。
(3)顯色參與新鮮的底物液，37℃反應(yīng)一定時(shí)間后，去掉底物液，加蒸餾水洗刷中止反應(yīng)。
(4) 關(guān)閉 將硝酸纖維素膜置于關(guān)閉液中，37℃感作15－30分鐘。關(guān)閉液多選用富含正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。
(5) 加被檢血清 可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再參與一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應(yīng)一定時(shí)間，用洗刷液洗三次，每次1－3分鐘。洗刷液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。
(6) 效果判定 以陽性、陰惡血清作為對照，膜片基地出現(xiàn)深棕赤色斑斕者為陽性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。
原代細(xì)胞HPMSC tRNA 人肺間充質(zhì)干細(xì)胞總RNA 10 µg
HMEpiC tRNA 人上皮細(xì)胞總RNA 10 µg
HMF tRNA 人成纖維細(xì)胞總RNA 10 µg
HUVEC tRNA 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNA 10 µg
HUAEC tRNA 人臍動脈內(nèi)皮細(xì)胞總RNA 10 µg
HUVSMC tRNA 人臍靜脈平滑肌細(xì)胞總RNA 10 µg
HUASMC tRNA 人臍動脈平滑肌細(xì)胞總RNA 10 µg
HBMEC miRNA 人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA 1 µg
HBCSMC miRNA 人腦血管平滑肌細(xì)胞微小RNA 1 µg
HBVP miRNA 人腦血管周細(xì)胞微小RNA 1 µg
HCPEC miRNA 人脈絡(luò)叢內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA 1 µg
HCPEpiC miRNA 人脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞微小RNA 1 µg
HCPF miRNA 人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞微小RNA 1 µg
HMC miRNA 人腦膜細(xì)胞微小RNA 1 µg
HN miRNA 人神經(jīng)元微小RNA 1 µg
HCGC miRNA 人小腦顆粒細(xì)胞微小RNA 1 µg
HN-h miRNA 人海馬趾神經(jīng)元微小RNA 1 µg
HOPC miRNA 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞微小RNA 1 µg
HOPC-os miRNA 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長微小RNA 1 µg
HSC miRNA 人雪旺細(xì)胞微小RNA 1 µg
HPC miRNA 人神經(jīng)束膜細(xì)胞微小RNA 1 µg
HA miRNA 人星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA 1 µg
HA-c miRNA 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA 1 µg
HA-sp miRNA 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA 1 µg
HA-h miRNA 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA 1 µg
HM miRNA 人小膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA 1 µg原代細(xì)胞
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