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原代細胞原理

閱讀:62發布時間:2017-07-24

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原代細胞原理:
酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE,含0.1%明膠)電泳分離,然后在有二價金屬離子存在的緩沖 系統中使樣品中的MMP-9恢復活性,在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠,zui后用考馬斯亮藍將凝膠染色,再脫色,在 藍色背景下可出現白色條帶,條帶的強弱與MMP-9活性成正比。
操作步驟:
1.標準品的稀釋:MMP-9檢測試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
原代細胞HPAF    人肺動脈成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPAEpiC    人肺泡上皮細胞    1 x 10^6 cells/vial
HBEpiC    人支氣管上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HTEpiC    人氣管上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HSAEpiC    人小氣道上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPF    人肺成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPF    人肺成纖維細胞    1 x 10^6 cells/vial
HBSMC    人支氣管平滑肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HTSMC    人氣管平滑肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HBF    人支氣管成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial
HSkMC    人骨骼肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HSkMSC    人骨骼肌衛星細胞    5 x 10^5 cells/vial
HSkMM    人骨骼肌成肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HACC    人腎上腺皮質細胞    5 x 10^5 cells/vial
HRGEC    人腎小球內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HRPTEpiC    人腎小管上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HRCEpiC    人腎皮質上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HREpiC    人腎臟上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HRMC    人腎系膜細胞    5 x 10^5 cells/vial
HBIMEC    人膀胱微血管內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HBdSMC    人膀胱平滑肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HUC    人尿道上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HBdSF    人膀胱基質成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPrMEC    人前列腺微血管內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPEpiC    人前列腺上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPSMC    人前列腺平滑肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HPrF    人前列腺成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial
HCO    人顱骨成骨細胞    5 x 10^5 cells/vial
HO-f    人股骨成骨細胞    5 x 10^5 cells/vial
HC-a    人軟骨細胞    5 x 10^5 cells/vial
HS    人滑膜細胞    5 x 10^5 cells/vial
HNPC    人髓核細胞    5 x 10^5 cells/vial
HAFC    人纖維環細胞    5 x 10^5 cells/vial
HHSEC    人肝竇內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HIBEpiC    人肝內膽管上皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HH    人肝細胞    1 x 10^6 cells/vial
HHSteC    人肝星形細胞    5 x 10^5 cells/vial
HSEC    人脾臟內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HSF    人脾臟成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial
HCMEC    人心臟微血管內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HCAEC    人冠狀動脈內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HAEC    人主動脈內皮細胞    5 x 10^5 cells/vial
HASMC    人主動脈平滑肌細胞    5 x 10^5 cells/vial
HAF    人主動脈成纖維細胞    5 x 10^5 cells/vial原代細胞

 


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