甜菜堿溶液,5M,PCR 級1.5mL實驗步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:
1. 按下表配制 RT 反應體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或專一的 RNA 0.5-1 ug
注意:RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。 引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意:隨機引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水 補水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含 dNTP)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對富含二級結構的高 GC RNA 模板,可以改成 45℃保 溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則改成 25℃ 5 分鐘)。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然 后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。此步為 RT 反應。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應,放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于 第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
甜菜堿溶液,5M,PCR 級1.5mL實驗步驟按下表配制 RT 反應體系:
對照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或對照引物 2 uL
RNase-free 水 補水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer(含標記 dNTP,本試劑不提供)。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機引物,則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),反應終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘(但如果使用隨機引物,需要先 25℃保溫 10 分鐘,然后再轉移到 42℃保溫 60 分鐘)。
7. 加 1uL 0.5M EDTA,放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上,電泳一般能出現 1.1Kb 的片段(如果使用隨機引物,將出現多個小片段)。
產品介紹:
產品及特點:
本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏 鼠白血病病毒反轉錄酶(M-MuLV RT)高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉錄酶,內源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機引物和 RNA 專一性引物三種引物(前兩種本試劑盒提 供)。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構建、RT-PCR、探針標記等。
還原糖:≤0.10%
〖熔點〗:148~152℃
〖灼燒殘渣〗:≤0.1%
〖重金屬〗:≤10ppm
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:白色結晶或結晶粉未,清涼味甜,無異味
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗
〖保存〗:RT
低聚果糖
〖英文名稱〗:FOS;Fructo-oligosaccharide
〖其他名稱〗:寡果糖;蔗果低聚糖;果寡糖;蔗果三糖族低聚糖
〖CAS號〗:308066-66-2
〖級別〗:BR
低聚果糖〖含量〗:≥90.0%
葡萄糖+蔗糖+果糖:≤10%
水分:≤5.0%
藍色葡聚糖 2000 平滑肌細胞生長因子 ( 不含血清 )
阿拉伯樹膠粉 前列腺上皮細胞生長因子
果膠 前脂肪細胞生長因子
明膠 上皮細胞生長因子
酪蛋白 上皮細胞生長因子
α- * 上皮細胞生長因子 -2
D- 氨基酸氧化酶 少突膠質前體細胞生長因子
L- 氨基酸氧化酶 少突膠質前體細胞生長因子
β- * 少突膠質細胞生長因子
*酶 神經元生長因子
卵白蛋白 腎系膜細胞生長因子
天冬氨酸轉氨酶 髓核細胞生長因子
碳酸酐酶 ( 牛紅血球 ) 小膠質細胞生長因子
過氧化氫酶 ( 牛肝 ) 心肌細胞生長因子
過氧化氫酶