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6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)步驟

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產(chǎn)品簡介

6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)步驟運(yùn)輸及保存低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細(xì)介紹

6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):

本試劑盒提供合成 cDNA *鏈所需要的全部試劑。其原理是用突變的莫洛尼氏鼠白血病病毒反轉(zhuǎn)錄酶（M-MuLV RT）高效合成 mRNA 的全長 cDNA 拷貝。
1. 使用突變的反轉(zhuǎn)錄酶，內(nèi)源 RNase H 活性低。
2. zui長可合成 13 Kb 的 cDNA。
3. 可以使用 oligo-dT、隨機(jī)引物和 RNA 專一性引物三種引物（前兩種本試劑盒提供）。
4. 總 RNA、poly(A)+RNA 或特殊 RNA 均可作為模板。
5. 可用于 cDNA 文庫構(gòu)建、RT-PCR、探針標(biāo)記等。

6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)步驟合成建文庫用的 1st-strand cDNA:

1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系: RNA 模板 poly(A) mRNA 1 ug 或?qū)Ｒ坏?RNA 0.5-1 ug
注意：RNA 樣品不能含有基因組 DNA 污染。引物 Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL 或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL 或 RNA 模板專一性引物 100 pmol 注意：隨機(jī)引物于 RNA 模板的比例跟 cDNA 合成的平均長度成反比。 RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL 2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含 dNTP）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。對(duì)富含二級(jí)結(jié)構(gòu)的高 GC RNA 模板，可以改成 45℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則改成 25℃ 5 分鐘）。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。此步為 RT 反應(yīng)。
7. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以用于第二鏈 cDNA 的合成或放置在-20℃*保存。
6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)步驟按下表配制 RT 反應(yīng)體系:
對(duì)照 RNA 模板(0.5 ug/uL) 2 uL
引物
Oligo (dT)18(0.5 ug/uL) 1 uL
或隨機(jī)引物(0.2 ug/uL) 1 uL
或?qū)φ找?2 uL
RNase-free 水補(bǔ)水到 13 uL
2. 70℃保溫 5 分鐘后立即冰浴。
3. 再加入 5 uL RT Buffer（含標(biāo)記 dNTP，本試劑不提供）。
4. 37℃保溫 5 分鐘。如果使用隨機(jī)引物，則保溫溫度只能是 25℃。
5. 加入 2 uL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），反應(yīng)終體積為 20uL。
6. 42℃保溫 60 分鐘（但如果使用隨機(jī)引物，需要先 25℃保溫 10 分鐘，然后再轉(zhuǎn)移到 42℃保溫 60 分鐘）。
7. 加 1uL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8. 電泳檢測。合成的 cDNA 的量一般有加入 RNA 總量的 50%以上，電泳一般能出現(xiàn) 1.1Kb 的片段（如果使用隨機(jī)引物，將出現(xiàn)多個(gè)小片段）。

C15H17BrN4O=349.23
〖級(jí)別〗：AR
〖含量〗：≥80.0%
鈾靈敏性實(shí)驗(yàn)：合格
乙醇溶解實(shí)驗(yàn)：合格
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：暗橙紅色結(jié)晶或粉末。能溶于乙醇、丙同和乙酸，不溶于水。
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)顯色劑，光度法測定Cd，〖鎳〗Ni等。
〖保存〗：RT
4-羥基偶氮苯
〖英文名稱〗：4-Phenylazophenol；4-Hydroxy-azo-benzene； Solvent yellow 7；C.I. 11800
〖其他名稱〗：對(duì)羥基偶氮苯；對(duì)苯偶氮酚；4-苯基偶氮*；溶劑黃7；4-N-苯基苯酰胺
〖CAS號(hào)〗：1689-82-3

6nt 隨機(jī)引物，0.5μg/μL5μg實(shí)驗(yàn)步驟一站式 RNA 電泳套裝   小鼠 RFP 標(biāo)簽單抗
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶   小鼠 RFP 標(biāo)簽單抗
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶   小鼠抗 VSV-G 標(biāo)簽單抗
cDNA *鏈合成試劑盒   小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗
cDNA *鏈合成試劑盒   小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗
質(zhì)粒（載體）列表   小鼠抗 CBP 標(biāo)簽單抗
質(zhì)粒 ( 載體 ) 系列產(chǎn)品   小鼠抗 HSV 標(biāo)簽單抗
非凍型血液 DNA 保存液   小鼠抗 E2 標(biāo)簽單抗
非凍型血液 DNA 保存液   小鼠抗 S1 標(biāo)簽單抗
硅膠膜離心吸附柱系列 ( 小提 )   小鼠抗 Tag-100 標(biāo)簽蛋白單抗
非酶 RNA 清除劑 2.0   小鼠抗 HPC4 標(biāo)簽蛋白單抗
電泳耐熱型 SYBR 染料   小鼠抗 SUMO 標(biāo)簽蛋白單抗
   核酸內(nèi)切酶 VIII