人甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)Elisa試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人甲胎蛋白異質體 3(AFP-L3)水平。用純化的人
甲胎蛋白異質體 3(AFP-L3)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入
甲胎蛋白異質體 3(AFP-L3)，再與 HRP 標記的甲胎蛋白異質體 3(AFP-L3)抗體結合，形成抗
體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉
化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲胎蛋白異質體
3(AFP-L3)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣
品中人甲胎蛋白異質體 3(AFP-L3)濃度。
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
：021 60340850 021 60340830 021 60340820
客服 ：372584443 1091953152 827774711
人甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)Elisa試劑盒操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
1600ng/L
5 號標準品
150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
800ng/L
4 號標準品
150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
400ng/L
3 號標準品
150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
200ng/L
2 號標準品
150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
100ng/L
1 號標準品
150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7.溫育：操作同 3。
8.洗滌：操作同 5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。
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