細(xì)胞株檢驗(yàn)方法
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）。
注意事項(xiàng)
1. 在使用前，一抗二抗均應(yīng)測(cè)試其合適的稀釋度。
2. 多聚甲醛的固定是不穩(wěn)定的，標(biāo)本經(jīng)多聚甲醛固定后，應(yīng)再用去污劑處理，如果標(biāo)本在水溶液中浸泡的時(shí)間過長(zhǎng)，則會(huì)使交聯(lián)結(jié)構(gòu)解體。因此，應(yīng)避免固定后的標(biāo)本在水溶液中浸泡的時(shí)間過長(zhǎng)。
3. 信號(hào)微弱的解決方法：
① 提高一抗和二抗的濃度以增強(qiáng)敏感性 ，這必須測(cè)試各種濃度抗體的滴度；
② 延長(zhǎng)一抗和二抗的孵育時(shí)間。由于細(xì)胞染色時(shí)抗原吸附在固相載體上，抗原抗體結(jié)合時(shí)間較在溶液中長(zhǎng)。孵育時(shí)間可因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)作適當(dāng)調(diào)整，但少于20min抗體和抗原幾乎不能有效結(jié)合。在以上兩點(diǎn)中，應(yīng)摸索出一個(gè)條件以產(chǎn)生有效信號(hào)且保持良好的背景。這就需要反復(fù)試驗(yàn)，因?yàn)槊拷M抗體和抗原的情況會(huì)有所不同；
③ 改變檢測(cè)方法，用共聚焦顯微鏡觀察，可提高敏感性。
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CCCSCK        
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