一、準備
1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、異丙醇、75%滅酶異醇、冷PBS、1.5ml滅酶EP管、滅酶槍頭、一次性手套、EP管架、吸管

2、 打開冷凍離心機4℃預冷

二、操作步驟：
將Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、滅酶槍頭、一次性手套、EP管架、吸管等物品帶入細胞室。

1、 取出EP管、做好標記

2、 取出細胞、收集上清保存備用

3、 用冷PBS沖洗細胞兩次

4、 加入1ml Trizol （24孔板每孔加0.5ml即可），調小刻度用移液器吹打細胞至液體澄清（生化：搖動混勻后室溫孵育10min）

5、 將裂解液轉移至1.5ml滅酶EP管中，用黃槍頭加入氯仿0.2ml（1/5 Trizol體積），用手劇烈震搖15秒，置室溫5min（生化：3min dxyer：15min），分層

6、 4℃、12000g（12300rcf）離心15min，可見分層。

7、 用黃槍頭小心收集上層水相約0.5ml置于另一1.5ml滅酶EP管中（確保不要吸入中間層和有機相）。

8、 各管分別加入0.5ml異丙醇（等體積），用力搖勻，置室溫10min。（提前將異丙醇4℃預冷，或混勻后置-20℃ 60min，提取效果更好）

9、 4℃、12000g離心10min，可見RNA沉淀。

10、倒棄上清，用濾紙吸干管口余液，加入預冷的75%滅酶異醇1ml，用指輕彈管壁使RNA沉淀飄起 洗滌。

11、4℃、7500g（7700rcf）離心5min，生化為10min，（亦有dxyer用12000g），沉淀即為總RNA。

12、棄上清，真空干燥約4min或空氣中干燥5~10min，加入20µl（30µl）DEPC水。
56℃水浴小于10min助溶，取少量測OD值，其余-70℃保存備