定量pcr實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)明操作
2 x taqMan Universal PCR Master Mix
20 x TaqMan Gene expression Kits

1. 模板、引物及探針用量
DNA用量：10 ~ 100 ng 每反應(yīng)；
cDNA用量：1 ~ 100 ng 總RNA反轉(zhuǎn)錄所得cDNA取1 μL。
引物和探針用量：
定量PCR實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)明操作

2．TaqMan探針法PCR反應(yīng)
定量PCR實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)明操作
總體積 20
PCR循環(huán)參數(shù)：
50 °C 2 min → 95 °C 10 min → (92 °C 15 sec → 60 °C 1 min) × 40個(gè)循環(huán)

3．SYBR Green I熒光染料法PCR反應(yīng)
定量PCR實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)明操作

PCR循環(huán)參數(shù)：
50 °C 2 min → 95 °C 10 min → (92 °C 15 sec → 60 °C 1 min) × 40個(gè)循環(huán)

5．7000 SDS v1.0軟件操作
檢查電腦與儀器的聯(lián)線是否正常，電腦應(yīng)處于外接電源供電狀態(tài)。開電腦，待桌面圖標(biāo)出現(xiàn)后，再打開7000主機(jī)電源，然后啟動(dòng)SDS應(yīng)用軟件。
新建文件 菜單File → New，Assay選擇Absolute Quantification (實(shí)時(shí)定量模式)，打開一個(gè)空白文件。
探針設(shè)置 雙擊任意一個(gè)孔，打開Well Inspector窗口。該窗口也可以從菜單View → Well Inspector打開。
使用軟件，或者探針（Detector）沒有設(shè)置好，請(qǐng)點(diǎn)擊Add Detector按鈕，打開Detector Manager窗口。該窗口也可以從菜單Tools → Detector Manager打開。如果Detector列表中沒有合適的探針，點(diǎn)擊按鈕File → New，新建探針：設(shè)定探針的名稱(建議使用所研究基因符號(hào)加標(biāo)記熒光，如GAPDH_FAM、ACTIN_VIC等)、報(bào)告基團(tuán)(FAM或者VIC)、淬滅基團(tuán)(TaqMan探針選TAMRA；MGB探針選None)、顏色(任意)等。設(shè)置完成后點(diǎn)擊OK，該探針即出現(xiàn)在探針列表中。重復(fù)設(shè)立其他的探針。