按現(xiàn)代的觀念，凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細胞不純的異物都應該視為污染。根據(jù)這一概念，組織培養(yǎng)污染物應包括生物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學物質（影響細胞生存、非細胞所需的化學成分）、細胞（非同種的其他細胞）。其中一微生物zui為多見。另外，隨著使用細胞種類增多，不同細胞交叉污染，尤其是Hela細胞的污染也時有發(fā)生，從而造成細胞不純。

一、污染途徑 污染物，特別是微生物常通過下列途徑進入培養(yǎng)體系，造成污染

1 空氣：空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑。空氣流動性大，如果培養(yǎng)操作場地于外界隔離不嚴格或消毒不充分，外界不潔空氣很容易進入造成污染。因此，培養(yǎng)設施不能設在通風場所。無菌操作應在凈化臺內進行，工作時要帶口罩，以免因講話、咳嗽等使外界污染進入操作面，造成污染。

2 器材：各種培養(yǎng)器皿、器械消毒不*和洗刷不干凈導致污染，另外需要對培養(yǎng)箱進行定期消毒，防止形成污染

3 操作：實驗操作無菌觀念不強，技術不熟練，使用污染的器皿或封瓶不嚴等，都可以造成污染。培養(yǎng)兩種細胞以上時，操作不規(guī)范，交叉使用吸管或培養(yǎng)液、瓶等有可能導致細胞交叉污染。

4 血清：有些血清在生產(chǎn)時就已經(jīng)被支原體或病毒等污染，變成了污染。

5 組織樣本：原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來源于組織樣本；取材時碘酒消毒后脫碘不*，可造成碘混入組織，細胞或培養(yǎng)液中，影響細胞細胞生長。

二、污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染的檢測

由于體外培養(yǎng)細胞自身沒有抵抗污染的能力，而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限，因而培養(yǎng)細胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無法挽回。細胞污染早期或污染程度較輕時，如果能及時去除污染物，部分細胞有可能恢復、但是當污染物持續(xù)存在培養(yǎng)環(huán)境中，輕者細胞生長緩慢，分類象減少，細胞變得粗糙，輪廓增強細胞漿出現(xiàn)顆粒、污染較嚴重，細胞增值停止，分裂象消失，細胞質中出現(xiàn)大量堆積物，細胞變圓、脫壁。

（一）細菌污染對培養(yǎng)細胞的影響及污染物的檢測

常見的污染細菌有大腸桿菌、假單孢菌、葡萄球菌等。細菌污染初期由于培養(yǎng)體系的抗生素作用，其繁殖處于抑制狀態(tài)，細胞生長不受明顯影響，污染情況用倒置顯微鏡觀察不易判斷。懷疑培養(yǎng)細胞有細菌污染時，取10ml細胞懸液離心1000轉5分鐘，沉淀中加入無抗生素培養(yǎng)液2ml,將細胞放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。