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上海士鋒生物科技有限公司
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促細(xì)胞分裂劑激活單核細(xì)胞

時間:2014-8-27閱讀:972
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本方法是通過促細(xì)胞分裂劑與細(xì)胞表面受體相互作用,在體外觸發(fā)細(xì)胞的多克隆激活。根據(jù)所使用的促細(xì)胞分裂劑的不同,應(yīng)答細(xì)胞可以是T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞,或兩者同時,或者是單核細(xì)胞。 細(xì)胞激活可以通過細(xì)胞增殖、細(xì)胞因子分泌、表面抗原表達(dá)和/或細(xì)胞體積的增加進(jìn)行檢測。例如在使用B細(xì)胞激活劑時,可以通過多克隆免疫球蛋白的分泌進(jìn)行檢測。

表1 常用的促細(xì)胞分裂劑和多克隆淋巴細(xì)胞激活劑 

促細(xì)胞分裂劑
所 用 濃 度

應(yīng) 答 細(xì) 胞

刀豆蛋白A ConA

1- 10 μg/ml

T 淋巴細(xì)胞

植物凝集素PHA

1-5 μg/ml

T 淋巴細(xì)胞

佛波醇酯PMA

1-10 ng/ml

T 淋巴細(xì)胞

婁諾霉素+PMA

100-500 ng/ml

T 淋巴細(xì)胞

脂多糖LPS

2-25 μg/ml

鼠b細(xì)胞(T不依賴型),

單核細(xì)胞

美洲商陸PWN

試驗測定

人B細(xì)胞(T依賴型)

葡萄球菌A,SAC

1/1000-1/10000

人B細(xì)胞


試劑和設(shè)備: 
細(xì)胞懸浮液; 
96孔平底組織培養(yǎng)板; 
含血清培養(yǎng)基(通常為 RPMI 1640,含10% 胎牛血清,100U/ml青霉素,100μg/ml鏈霉素); 
促細(xì)胞分裂劑(見表1),要求純品或半純品,有市售商品; 
多通道移液器和微量移液器; 
帶570nm濾片的酶標(biāo)儀; 
超凈工作臺; 
CO2孵箱; 
冷凍離心機(jī)。

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