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RNA操作注意事項(xiàng)與實(shí)驗(yàn)技巧2015/8/31

由于rna酶的廣泛存在與難以滅活的頑固特性。使得RNA的提取純化和后續(xù)工作變得非常困難。為了保證RNA的研究工作成功，請仔細(xì)閱讀下列注意事項(xiàng)，相信它能幫助您解決常見的問題。歸根究底，RNA工作的主要問...

特殊組織DNA的提取及鑒定2015/8/28

1、提取DNA的簡易方法:1)、從全血中提取DNA：取20μl抗凝血于0.5ml無菌管中，加500μl左右的ddH2O混勻后，12000rpm離心2分鐘，棄上清，（若沉淀中仍有紅細(xì)胞,需重復(fù)此操作1-...

RNA印跡雜交2015/8/20

Northern印跡的制備預(yù)備：1．按下述步驟，每泳道加10～20μg總RNA或0.5～1μgpoly(A)+RNA進(jìn)行甲醛/瓊脂糖凝膠電泳，將凝膠放在紫外線透照儀上，旁邊置一標(biāo)尺進(jìn)行拍照。a.總RN...

士鋒RNAi實(shí)驗(yàn)原理與方法2015/7/29

年來的研究表明，將與mRNA對應(yīng)的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA(dsRNA)導(dǎo)入細(xì)胞，可以使mRNA發(fā)生特異性的降解，導(dǎo)致其相應(yīng)的基因沉默。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制(post-transcri...

電泳操作要點(diǎn)及常見差錯(cuò)和失敗原因分析2015/7/24

醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。種薄膜對蛋白質(zhì)樣品吸附性小，幾乎能*消除紙電泳中出現(xiàn)的“拖尾”現(xiàn)象，又因?yàn)槟さ挠H水性比較小，它所容納的緩沖液也...

含多個(gè)磷酸化位點(diǎn)的多肽的合成2015/7/15

生命活動與蛋白質(zhì)的動態(tài)變化密切相關(guān),很多情況下某些蛋白質(zhì)是通過各種翻譯后修飾來完成或改變其功能。在數(shù)量眾多的蛋白質(zhì)翻譯后修飾中，蛋白質(zhì)磷酸化修飾無疑是zui重要的一類，它是指通過蛋白激酶（Protei...

外源基因的誘導(dǎo)表達(dá)2015/7/10

1．目的了解外源基因在原核細(xì)胞中表達(dá)的特點(diǎn)和方法。2．原理外源基因克隆在含有l(wèi)ac啟動子的表達(dá)系統(tǒng)中。先讓宿主菌生長，lacI產(chǎn)生的阻遏蛋白與lac操縱基因結(jié)合抑制下游的外源基因轉(zhuǎn)錄。向培養(yǎng)基中加入誘...

士鋒重組蛋白質(zhì)的表達(dá)、純化、復(fù)性和定量2015/7/2

一、重組蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)表達(dá)1.挑取轉(zhuǎn)化有質(zhì)粒的單菌落，接種于3ml選擇性LB液體培養(yǎng)基中，37℃，250rpm/min振搖培養(yǎng)過夜。2.次日將培養(yǎng)過夜的菌液500μl再接種于10ml（1:20）選擇性L...

四種紫外吸收法測蛋白質(zhì)含量2015/6/23

1.280nm的光吸收法因蛋白質(zhì)分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm處具有zui大吸收，且各種蛋白質(zhì)的這三種氨基酸的含量差別不大，因此測定蛋白質(zhì)溶液在280nm處的吸光度值是zui常用的紫外吸...

科學(xué)家可定位蛋白質(zhì)2015/6/15

約翰斯霍普金斯大學(xué)的科學(xué)家們使用一種他們研發(fā)的方法，在將人體中一種細(xì)胞移動到位點(diǎn)時(shí)，能夠不時(shí)的進(jìn)行觀察。這種方法可以了解一種蛋白質(zhì)為何和如何在一個(gè)位置能進(jìn)行信號傳遞和表達(dá)增加，而同樣的蛋白質(zhì)在另一地點(diǎn)...

免疫共沉淀技術(shù)在探索可能信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制中的應(yīng)用2015/6/11

在從事細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究過程中我們常常需要探尋新的通路。在縱橫交錯(cuò)，紛繁復(fù)雜的cross-talk中如何篩選可能的路徑是signaltransduction領(lǐng)域永恒的話題，而免疫共沉淀技術(shù)則是常用而簡...

醋酸纖維素薄膜電泳操作要點(diǎn)及常見差錯(cuò)和失敗原因分析2015/6/9

醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙酰化形成的纖維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。種薄膜對蛋白質(zhì)樣品吸附性小，幾乎能*消除紙電泳中出現(xiàn)的“拖尾”現(xiàn)象，又因?yàn)槟さ挠H水性比較小，它所容納的緩沖液也...

血漿游離血紅蛋白測定2015/6/3

實(shí)驗(yàn)原理血紅蛋白具有類過氧化物酶活性，可催化H2O2釋放新生態(tài)氧，使鄰甲聯(lián)苯胺氧化發(fā)生顏色變化，由無色zui終變?yōu)樗{(lán)紫色。根據(jù)顯色深淺與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，可測出其含量。實(shí)驗(yàn)方法材料：1．2g/L鄰甲聯(lián)苯胺...

蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離和純化2015/6/1

目的要求（1）了解克隆基因表達(dá)的方法和意義。（2）了解重組蛋白親和層析分離純化的方法。實(shí)驗(yàn)原理克隆基因在細(xì)胞中表達(dá)對理論研究和實(shí)驗(yàn)應(yīng)用都具有重要的意義。通過表達(dá)能探索和研究基因的功能以及基因表達(dá)調(diào)控的...

iTRAQ蛋白質(zhì)定量與生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)技術(shù)平臺2015/5/29

定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)研究的前沿學(xué)科。目前常用的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)有熒光差異凝膠電泳（DIGE）、同位素親和標(biāo)記（ICAT）等。同位素標(biāo)記相對和定量（iTRAQ）技術(shù)是近年來開發(fā)的一種新的蛋白質(zhì)組...