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免疫熒光技術(shù)之熒光顯微鏡檢查方法2015/1/5

、熒光顯微鏡熒光顯微鏡是免疫熒光組織化學(xué)的基本工具，分透謝和落射二種類型，落射光無需鏡內(nèi)操作，方便、效果更好。它是由超高壓光源、濾板系統(tǒng)（包括激發(fā)和壓制濾板）和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的...

免疫磁性微珠分離法分離T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞2014/12/29

材料及試劑1.磁性激活細(xì)胞分離器（MACS）：MACS柱（C型，可結(jié)合2×108個(gè)細(xì)胞）生物素標(biāo)記的抗CD4單抗和抗CD8單抗2.生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgGF(Fab)23.FITC標(biāo)記的親和素4.生物...

細(xì)胞培養(yǎng)用途2014/12/22

細(xì)胞培養(yǎng)的用途包括：1、科學(xué)研究：藥物研究開發(fā)與基礎(chǔ)研究藥物研究與開發(fā)（1）新藥篩選：如化學(xué)合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。（2）疫苗研究與開發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾...

正常大鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)2014/12/4

正常大鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10...

人類外周血染色體制備2014/12/2

一、原理人外周血小淋巴細(xì)胞，通常都處在G1期（或G0期），一般情況下不進(jìn)行分裂。如在培養(yǎng)液中加入植物血凝素（PHA），這種小淋巴細(xì)胞受到刺激可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞，進(jìn)入有絲分裂。短期培養(yǎng)后，經(jīng)秋水仙素處理...

外周血培養(yǎng)基配制2014/11/27

一、配制用水培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬歐姆，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然...

細(xì)胞傳代吹打減少氣泡的方法2014/11/25

1.有一些細(xì)胞可以不用消化液就能夠吹打下來。個(gè)人認(rèn)為能不用消化液是的。譬如巨噬細(xì)胞。我一直維持巨噬細(xì)胞，每次傳代都不用消化液，吹打的時(shí)候我一般會(huì)用瓶內(nèi)未換的剩余舊培養(yǎng)液，這樣子比用新的培養(yǎng)基可以減少點(diǎn)...

細(xì)胞凋亡檢測-形態(tài)學(xué)2014/11/21

1、光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡（1）未染色細(xì)胞：凋亡細(xì)胞的體積變小、變形，細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象，細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。（2）染色細(xì)胞：常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡...

培養(yǎng)細(xì)胞的保存和復(fù)蘇2014/11/19

做實(shí)驗(yàn)前要先學(xué)會(huì)凍存，以備自己在后面的實(shí)驗(yàn)中能保持同一來源、穩(wěn)定可靠的細(xì)胞，且可減少污染或其它不利影響。1、影響凍存細(xì)胞活性的因素（1）細(xì)胞凍存保護(hù)劑：常用的有二甲基亞砜（DMSO）和甘油，常用的濃度...

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)2014/11/17

腫瘤細(xì)胞在組織培養(yǎng)中占有核心的位置，首先癌細(xì)胞是比較容易培養(yǎng)的細(xì)胞。當(dāng)前建立的細(xì)胞系中癌細(xì)胞系是zui多的。另外腫瘤對(duì)人類是威脅zui大的疾病。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)是研究癌變機(jī)理、抗癌藥檢測、癌分子生物學(xué)極其...

細(xì)胞培養(yǎng)污染的思考2014/11/17

污染是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中面臨的主要問題。由每一種細(xì)胞有其*的培養(yǎng)體系，因此污染造成后果也不盡相同。某些污染的發(fā)生往往難以察覺檢測，而且污染源能長期共存于培養(yǎng)體系中，這類染事實(shí)上大部分被人們忽視了。培養(yǎng)的細(xì)...

哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)及其研究進(jìn)展2014/11/14

按照宿主細(xì)胞的類型，可將基因表達(dá)系統(tǒng)大致分為原核、酵母、植物、昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。與其它系統(tǒng)相比，哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢在于能夠指導(dǎo)蛋白質(zhì)的正確折疊，提供復(fù)雜的N型糖基化和準(zhǔn)確的O型糖基化...

肺泡上皮細(xì)胞的分離2014/11/13

1、取得*無血液殘留的肺臟：實(shí)驗(yàn)前將大鼠全身血液放凈，取得*無血液殘留的肺臟。2、消化肺組織：常用于細(xì)胞消化的酶有胰蛋白酶、彈性蛋白酶、膠原酶。胰蛋白酶是zui早用于消化、分離上皮細(xì)胞的酶，現(xiàn)在一般用...

畢氏酵母感受態(tài)細(xì)胞制備及轉(zhuǎn)化2014/11/10

1、畢氏酵母氯化鋰轉(zhuǎn)化法（1）試劑1MLiCl（用去離子蒸餾水配制，濾膜過濾除菌；必要時(shí)用消毒去離子水稀釋）50%PEG3350（SigmaP3640用去離子蒸餾水配制，濾膜過濾除菌，用較緊的蓋子的瓶...

293細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)2014/11/5

1、293細(xì)胞明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時(shí),可順利貼壁生長,換液時(shí)動(dòng)作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次（輕），用0.02%EDTA與0.25%Tryps...