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SOC、TB、YPD培養(yǎng)基配制2016/7/18

SOC培養(yǎng)基成分、方法同SOB培養(yǎng)基的配制，只是在培養(yǎng)基冷卻到室溫后，除了在每100ml的小份中加1ml滅過菌的1mol/L氯化鎂外，再加2ml滅菌的1mol/L葡萄糖(18g葡萄糖溶于足夠水中，再用...

DNA轉(zhuǎn)化的要點(diǎn)及疑難解析2016/7/12

1、存放:超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞必須從干冰運(yùn)送包裝箱取出直接放入–80°C冰箱的底部.一定不要用液氮來存感受態(tài)細(xì)胞.1)存放條件:超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞對(duì)微小的溫度改變也極度敏感,因此必須存放在–80°C冰箱的底部....

外源DNA和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)篩選與操作步驟2016/7/6

DNA克隆技術(shù)是70年代分子生物學(xué)發(fā)展的重大成果，用限制性內(nèi)切酶直接切割分離某個(gè)外源DNA片段，與此同時(shí)用同一種限制性內(nèi)切酶切割載體DNA，兩個(gè)DNA產(chǎn)生同樣的粘性末端，將它們混合后，二者的粘性末端通...

農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備方法2016/7/4

農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備1.挑取少許農(nóng)桿菌LBA4404，接種于5mlLB液體培養(yǎng)基(含50mg/LSTR)中，28℃、200r/mim培養(yǎng)過夜。2.取2ml培養(yǎng)物于LB液體培養(yǎng)基(含50mg/LSTR...

從低熔點(diǎn)瓊脂糖凝膠中回收DNA片段操作步驟2016/6/28

1、將已經(jīng)電泳確定的可回收的酶切產(chǎn)物在合適濃度的回收用瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。換用新的電泳緩沖液10×TAE(10×Tris-乙酸)。2、當(dāng)溴酚藍(lán)遷移至足夠距離時(shí)(至少2cm以上)，在長波紫外燈下觀察，用...

DNA指紋圖譜分析原理與方法2016/6/22

一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握DNA指紋圖譜技術(shù)的概念、原理和基本操作過程2.學(xué)習(xí)DNA的限制性酶切的基本技術(shù)3.掌握瓊脂糖凝膠電泳的基本操作技術(shù)，學(xué)習(xí)利用瓊脂糖凝膠電泳測定DNA片段的長度，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行...

利用堿裂解法提取與純化質(zhì)粒DNA2016/6/12

細(xì)菌質(zhì)粒是一類雙鏈、閉環(huán)的DNA，大小范圍從1kb至200kb以上不等。各種質(zhì)粒都是存在于細(xì)胞質(zhì)中、獨(dú)立于細(xì)胞染色體之外的自主復(fù)制的遺傳成份，通常情況下可持續(xù)穩(wěn)定地處于染色體外的游離狀態(tài)，但在一定條件...

質(zhì)粒DNA的小量快速提取2016/5/30

一、目的及要求。1、了解質(zhì)粒作為載體在基因工程中的作用2、熟記提取質(zhì)粒的基本原理，學(xué)習(xí)提取過程和方法3、為下一步實(shí)驗(yàn)提供高純度的DNA樣品二、原理：1、質(zhì)粒（Plasmid）：獨(dú)立于染色體以外的雙鏈、...

DNA 序列分析技術(shù)2016/5/25

物種的遺傳多樣性在本質(zhì)上是DNA一級(jí)序列的多樣性。近年來，隨著DNA測序技術(shù)的迅速發(fā)展和日益普及，DNA測序在遺傳多樣性的研究中正在起著越來越大的作用。本章將介紹目前在遺傳多樣性研究中常用的一種手動(dòng)和...

PCR－RFLP分析技術(shù)2016/5/23

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制條件在體外酶促合成特異DNA片段的循環(huán)反應(yīng)，可使目的DNA片段得以迅速擴(kuò)增。其主要步驟是：將待擴(kuò)增的模板DNA置于高溫(約93℃-95℃)下使之變性解鏈；人...

核酸分離與純化的原理及其方法學(xué)進(jìn)展2016/5/16

核酸的分離與純化技術(shù)是生物化學(xué)與分子生物學(xué)的一項(xiàng)基本技術(shù)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)及其相關(guān)等領(lǐng)域,核酸的分離與純化技術(shù)也得到進(jìn)一步發(fā)展。各種新方法、經(jīng)完善后的傳統(tǒng)經(jīng)典方法以及商品試劑方...

生物信息學(xué)常見術(shù)語2016/5/11

BLAST：BasicLocalAlignmentSearchTool，基本的基于局部對(duì)準(zhǔn)的搜索工具；一種快速查找與給定序列具有連續(xù)相同片斷的序列的技術(shù)。Entrez：美國國家生物技術(shù)信息中心所提供的...

RNA分析的幾個(gè)熱點(diǎn)領(lǐng)域及主要技術(shù)路線2016/5/9

DNA，RNA和蛋白質(zhì)是三種重要的生物大分子，是生命現(xiàn)象的分子基礎(chǔ)?；蚪MDNA中的基因通過轉(zhuǎn)錄為mRNA并進(jìn)一步翻譯為蛋白質(zhì)，很多種類的蛋白質(zhì)在zui終發(fā)揮功能時(shí)又經(jīng)歷磷酸化、糖基化、酶原激活等翻譯...

單核苷酸多態(tài)性2016/5/3

SingleNucleotidePolymorphisms(SNPs)representanaturalgeneticvariabilityathighdensityinthehumangenome....

PCR假陰性問題總結(jié)2016/4/25

PCR的假陽性問題深受重視，但我個(gè)人認(rèn)為PCR假陰性問題相對(duì)于臨床檢測更為嚴(yán)重。其實(shí)PCR假陽性的問題是比較單純的，一般僅涉及污染和引物的非特異性問題。而污染可以通過嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理，合理的環(huán)境設(shè)置，...