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一、準備1、物品:Trizol、氯仿(三氯甲烷)、異丙醇、75%滅酶異醇、冷PBS、1.5ml滅酶EP管、滅酶槍頭、一次性手套、EP管架、吸管2、打開冷凍離心機4℃預冷二、操作步驟:將Trizol、氯...
一、探針的類型核酸分子探針是指用放射性核素或其他標記物標記的、能與特定的靶分子發(fā)生特異性相互作用的DNA或RNA片段。1.基因組DNA探針:病毒DNA等2.cDNA探針;zui常用3.寡核苷酸探針:1...
聚合酶鏈反應-單鏈構象多態(tài)性分析(SingleStrandConformationPolymorphismAnalysisofPolymeraseChainReactionProducts,PCR-S...
少量的DNA序列的準確定量曾經(jīng)是一件很難很累的事情,不過realtimePCR的出現(xiàn)把它變?yōu)楹推胀≒CR差不多一樣容易。原理是利用能特異標記PCR產(chǎn)物的熒光物質,顯示PCR產(chǎn)物的動態(tài)累積,得到S型的擴...
在做Northern等雜交實驗、構建cDNA文庫、獲取能夠編碼真核生物蛋白的基因、獲得RNA病毒基因時,會用到RNA提取和RT-PCR技術。真核生物的基因組是DNA,為什么不直接從DNAPCR得到我們...
常見問題具體情況可能的原因處理辦法備注樣品準備問題菌培養(yǎng)不好或失敗抗性不對或菌已死核對抗性,盡可能提供載體信息。或菌培養(yǎng)條件特殊重新提供菌液,或提供2ug純化質粒。質粒提不出質粒拷貝數(shù)極低或客戶自己采...
篩選之前確定G418濃度:1,由于每種細胞對G418的敏感性不同,而且不同的廠家生產(chǎn)的G418有效成分的比重不同,一般1g的粉劑中有效的G418含量大約為0.722g。2,G418是新霉素的類似物,兩...
磷酸鈣-DNA共沉淀法核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式出現(xiàn)時,可使DNA附在細胞表面,利于細胞吞入攝取,或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內,進入細胞的DNA僅有1%~5%可以進入細胞核中,其...
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提要分離并克隆差異表達基因是目前功能性基因研究的熱點。mRNA差異展示是篩選差異表達基因zui有效的技術之一,它的主要不足是有一定假陽性。RDA、SSH、DSD、LSH技術能夠克服假陽性,但也具有一定...
1顯性標記與選擇效率一部分分子標記系統(tǒng)如RAPD、AFLP具有顯性或部分顯性的特點,無法區(qū)分基因是純合還是雜合,不能提供完整的遺傳信息。Haley等(1994)提出相斥相(Repulsion-phas...
核酸以磷酸鈣-DNA共沉淀物的形式出現(xiàn)時,可使DNA附在細胞表面,利于細胞吞入攝取,或通過細胞膜脂相收縮時裂開的空隙進入細胞內,進入細胞的DNA僅有1%~5%可以進入細胞核中,其中僅有不到1%的DNA...
溶液配制(一)lb培養(yǎng)基每1000mL加分析純NaCl10g,蛋白胨10g,酵母粉5g,用ddH2O配制,再用10MNaOH調pH至7.4(100mL一般加450µL),高溫高壓蒸汽滅菌1...
菌落PCR(ColonyPCR)可不必提取基因組DNA,不必酶切鑒定,而是直接以菌體熱解后暴露的DNA為模板進行PCR擴增,省時少力。建議使用載體上的通用引物。通常利用此方法進行重組體的篩選或者DNA...
在已知基因部分核苷酸序列或全部核苷酸序列的情況下,基因的制備方法主要可分為兩大類:一類是基因化學合成法,一類是基因生物制備法。一般又可將基因生物制備法分為基因組文庫法、cdna文庫法和PCR法等。1化...
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