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一、實驗目的掌握測定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟。二、實驗原理將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解產生氨的反應。用過量的鹽酸溶液中和所產生的...
（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法...
一、*向等電聚焦1.從冰箱中取-20℃冷凍保存的水化上樣緩沖液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室溫溶解。2.在小管中加入0.01gDTT，Bio-Lyte4-6、5-...
一、實驗原理雙縮脲法（Biuret法）和Folin―酚試劑法（Lowry法）的明顯缺點和許多限制，促使科學家們去尋找更好的蛋白質溶液測定的方法。1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Brad...
1.硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜是蛋白印跡zui廣泛使用的轉移介質，對蛋白有很強的結合能力，而且適用于各種顯色方法，包括同位素，化學發光（Luminol類）、常規顯色、染色和熒光顯色；背景低，信噪比高。N...
實驗原理醋酸纖維薄膜電泳是用醋酸纖維薄膜作為支持物的電泳方法。它具有簡便、快速、樣品用量少，應用范圍廣，分離清晰，沒有吸附現象等優點。目前已廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、多肽、核酸、同工...
醋酸纖維薄膜電泳（celluloseacetatemembranceelectrophoresis）以醋酸纖維薄膜為支持物。它是纖維素的醋酸酯，由纖維素的羥基經乙酰化而制成。它溶于丙酮等有機溶液中，即...
目前常用比色法測定樣品蛋白的含量：Bradford法（考馬斯亮藍法）、Lowry法（Folin-酚試劑法）、BCA法等。但各有優缺點，大家可以根據具體情況選取。按相應蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定...
一、培養細胞（culturecell）樣品處理方法：培養動物組織細胞由于沒有細胞壁，因此可以將細胞收集下來，直接加入裂解緩沖液（Lysisbuffer）抽提總蛋白。裂解緩沖液有多種配方，本實驗室主要采...
1.280nm的光吸收法因蛋白質分子中的酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸在280nm處具有zui大吸收，且各種蛋白質的這三種氨基酸的含量差別不大，因此測定蛋白質溶液在280nm處的吸光度值是zui常用的紫外吸...
原理：這一方法基于考馬斯亮藍G-250有紅藍兩種不同的形式。在一定濃度的乙醇及酸性條件下，可配成淡紅色的溶液，當與蛋白質結合后，產生藍色化合物，反應迅速而穩定。反應化合物在465-595nm處有zui...
1、將重組質粒（BL21-2?2或Rossatta-2?2）的表達菌37℃搖培過夜后，1：20擴配（約需1h15m）；2、至OD600=0.5~0.7時（約1h15min~1h45min），在15-（...
瓊脂糖（agarose）是經過挑選，以質地較純的瓊脂（agar）作為原料而制成的。瓊脂在化學上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質，這種性質會給電泳及凝...
本實驗利用超氧化物歧化酶的解離性質，在一定緩沖液條件下與離子交換纖維素吸附和解吸的能力不同于溶液中雜蛋白，進而除去雜蛋白。實驗中選用DE-32離子交換纖維素。相關原理請參見實驗教材中離子交換層析一章。...
做純化的人可能經常接觸到sephadex，BIO-Gel，sephacryls-,sepharoseBIo-Gel等幾種填料，有時會混淆在一起，看到一個貼子較好的介紹了這些填料的區別，希望對大家有用。...
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